变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因comD及gbpB突变的检测

发布时间：2020-06-13 03:18

【摘要】：目的: 龋病是在以细菌为主的多种因素作用下发生的牙体硬组织疾病，变形链球菌在龋病的发生发展过程中发挥着重要的作用,主要表现在它的产酸性和耐酸性.随着现代分子生物学的发展，及对变形链球菌耐酸性的深入研究，现已鉴定并检测出多条耐酸相关基因,其中包括comD和gbpB基因。氟化物的防龋功效已被世人所公认，，并在全世界推广使用。科学实验证明适量的使用氟化物能够有效的防止龋病的发生，然而长期大量的应用氟化物可能导致耐氟菌株的生长，它比亲代野生型菌株有更强的致龋能力。com感受态基因家族是一个重要的双组分信号传导系统(TCSTS),其中comD基因的编码产物为一种跨膜感受器,它能感受特异性刺激，将外界信号传递到胞内,产生一系列的生物学性状改变。gbpB在变形链球菌的附着方面有着重要的作用，它们在细菌间及细菌与菌斑基质间起着“桥梁”作用。然而变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因comD及gbpB突变与耐氟菌株耐酸性增强的关系方面的研究未见报道。本实验通过诱导变形链球菌耐氟菌株，检测其耐酸相关基因comD及gbpB的突变位点，从基因水平上揭示变形链球菌耐氟菌株致龋机制，明晰耐氟菌株耐酸基因突变与致龋强度的关系，为今后合理的利用氟化物及研制新的防龋疫苗打下基础。 方法: 1变形链球菌耐氟菌株的体外诱导 2变形链球菌耐氟菌株全基因组的提取 3构建重组质粒:以变形链球菌耐氟菌株基因组为模板，对耐酸相关基因comD和gbpB进行PCR。将PCR产物与PMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞(E. coli JM109)中构建重组质粒。 4提取质粒，PCR及酶切鉴定测序。 结果: 成功构建了重组质粒。通过使用BLAST工具对所获得的comD和gbpB基因片段与GenBank中所发表的comD和gbpB的基因序列进行同源性比对。结果发现，变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因gbpB的基因序列与GenBank中所发表的gbpB的基因序列完全相同。然而，comD的基因序列与GenBank中所发表的comD基因序列有1处不同：位于1795538（A G）。 结论: 成功的在大肠杆菌感受态细胞中构建了变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因comD和gbpB的重组质粒，并分别进行PCR及酶切鉴定及DNA测序，此研究对于今后龋病的防治具有重要的意义。
【图文】：

图 1. BHI 固体培养基培养 UA159FRD 及 gbpB 的 PCR 产物：allk 发表的变形链球菌 comD 和 gbpB 的基因序列，在保因全长 1325bp,pCR 产物长度 1391bp。：5’ATGAATGAAGCCTTAATGATACTTTCAAATGG3’: 5’ CTATTTTATTATTAGGAGTTGCTTGAATAAATGATGR 扩增，所得产物 1%琼脂糖凝胶电泳，可见大约为 1391b计相符。见图 3因全长 1295bp，pCR 产物长度 1356bp。:5’ATGAAAAAAAGAATTTTATCAGCA3’

DL2000Maker2.comDPCR产物3.gbpBPCR产物p
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.1

【参考文献】

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本文编号：2710556