放射线对涎腺腺样囊性癌细胞NF-κB-P65蛋白表达与细胞凋亡的影响

发布时间：2020-06-17 03:54

【摘要】： 研究背景： 涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma of salivary glands, ACCs)又称圆柱瘤(cylindroma),是一种口腔科常见的恶性涎腺上皮来源性肿瘤。它有着局部侵袭性强,区域淋巴结转移率低,嗜神经血管生长,因而易发生血行远处转移等生物学特性,恶性程度高,放疗敏感性却较低。正是缘于此,该肿瘤被手术切除后有着较高的复发率。如能引入基因治疗的方法,提高腺样囊性癌对放疗的敏感程度,则能够给患者的生存率带来明显的改善。由于NF-κB信号转导通路的激活可能是肿瘤产生放疗抵抗性的主要根源之一,通过基因工程技术阻断该通路的表达活性或许能够起到提高腺样囊性癌细胞对放疗敏感性的作用。 研究目的： 对唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞进行高能X线照射后,在不同时间点上,通过多种方法检测细胞中NF-κB信号转导通路亚单位——p65蛋白表达程度以及细胞凋亡情况,并探究两者之间的相关性,从而获得一系列图像与数据资料。为进一步的放疗增敏实验、动物实验以及最终的临床应用打下良好的基础。 实验方法： 复苏并传代培养ACC-2细胞系。在细胞进入对数生长期之后,对其进行2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy五种剂量高能X线照射。在随后的1h、3h、6h、10h、24h、48h六个时间点上,分别采用以下四种不同的实验方法来实现对NF-κB信号转导通路活性的检测和细胞凋亡的统计与观察：通过免疫细胞化学法观察各放射剂量组P65蛋白在细胞中的表达随时间和空间变化的情况,并拍摄留取图片资料；通过免疫蛋白印渍(western blotting)法,对细胞中P65蛋白含量进行半定量检测,以获取其在受到放射线照射后表达量的递变规律；最后,对不同时间点上细胞凋亡率采用流式细胞检测予以测定,进行TUNEL(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术)试验来观察发生凋亡细胞核的形态,并拍摄留取图片资料。以上各实验过程均严格控制细胞生长的外环境,并设置不接受放射线照射的空白对照组细胞,关键步骤另重复两遍以减少系统误差,采用必要的统计学方法对数据进行进行检验分析。 实验结果： 1.通过免疫细胞化学法可观察到,正常对照组细胞中P65蛋白很少出现在细胞核内,而多被定位于核周的细胞质之中；在受到放射线照射后,该蛋白开始大量穿过胞膜,渐渐进入细胞核中心区域,这一过程在放射剂量高的组比放射剂量低的组进展更快； 2.借助于western blotting, P65蛋白在细胞总蛋白中的含量被发现可随着时间逐渐发生变化,其在各组细胞中表达的峰值大约在放疗后6小时～10小时。同在照射后3小时时间点上,随着放疗剂量的增大,P65蛋白含量也与之俱增。 3.经过分析流式细胞检测的数据可以发现：在不同时间点上,细胞凋亡率不断地改变,该实验数据被绘制成曲线后,可见各放射剂量组细胞凋亡曲线的最低点位于放疗后10小时；同样在照射后3小时时间点上,细胞凋亡率随放射剂量的增加而有所降低,对照western blotting结果,则表现出了其相对于P65蛋白含量的负相关关系(应用Spearman等级相关法进行放射线照射剂量强度与细胞凋亡率之间关系的分析；检验水准取双侧α=0.05,结果P=0.0100.05)。 4.发生凋亡的细胞在TUNEL试验中被观察到了较为典型的形态学变化,如染色体浓集、核碎裂以及凋亡小体等,凋亡细胞比率的变化趋势与流式细胞检测的结果相同。 研究结论： 高能X射线与ACC-2细胞中P65蛋白的表达变化规律之间有着一定的时间——剂量效应关系。即细胞受到放射线照射之后,随时间推移,P65蛋白在空间上浓集的部位不断迁移,最终富集作用于细胞核相关区域,即特定部位与特定时间相对应；其在总蛋白中的含量亦不断改变,即特定含量对应特定时间,此为放射线与P65蛋白表达的时间效应关系。而放射线剂量的增大可以加速同一时间点上蛋白浓集部位的迁移过程,并可使蛋白含量随之升高,此为二者正相关的剂量效应关系。照射后各组细胞凋亡率变化曲线有其各自的特点,凋亡率与其P65蛋白表达量之间呈现出了负相关表现。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R739.87
【图文】：

Z的33457人CC一26GY6H再P249sc即川s，32231eventsStOPHjst7j佣佣cv.n招4:RIIIiii222俨俨俨DDD4444444工000图3流式细胞术检测细胞凋亡率散点图示例该图分为四个象限，AnnexinV着色较强而PI着色较浅之细胞，即凋亡细胞;第2第3象限中为相对正常细胞;第4象限中则为游离细胞器等细胞

山东大学硕士 1IN卿 0816二0158A”淤又一nV一PIACC一2Z的33457人CC一 26GY6H再P249sc即川s， 32231events StOPHjst7j佣佣cv.n招4:R IIIiii222

【相似文献】

相关会议论文 前10条

1 王守一;张东升;吴军楼;韩俊庆;张世周;张捷;牟文丽;;放射线对ACC-2细胞NF-κB-P65蛋白表达与细胞凋亡的影响[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年

2 徐晶晶;孙爱宁;国风;王文娟;;NF-κB信号通路在慢性B淋巴细胞性白血病细胞与骨髓造血微环境相互作用中的影响[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

3 陈龙浩;蒋琳兰;姚祥鑫;;复方银茶胶囊对实验性动脉粥样硬化兔MMP-2、NF-κB的影响[A];共铸医药学术新文明——2012年广东省药师周大会论文集[C];2012年

4 康艳梅;陈立军;沈海燕;赵明秋;琚春梅;陈金顶;;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对Marc-145细胞NF-κB信号通路影响的研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

5 严明;张萍;张志愿;关呈超;陈万涛;;NF-κB信号转导通路与口腔鳞癌转移关系的研究[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年

6 赵思成;骆丹;;熊果酸通过NF-κB通路诱导皮肤鳞癌细胞凋亡的研究[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年

7 喻鹏久;慈微;王广发;张俊艳;吴少瑜;徐伟;金宏;朱正光;张嘉杰;庞建新;吴曙光;;白花前胡甲素通过NF-κB通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年

8 罗梅宏;周永明;陆嘉惠;胡明辉;朱文伟;鲍计章;;获得性骨髓衰竭综合征患者外周血单个核细胞NF-κB转录本的定量研究[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

9 周林福;陈亮;朱全;王聪;徐海;崔学范;蒋雷服;黄茂;殷凯生;;极罕见的致命性窦组织细胞增生症伴巨大淋巴结病一例:NF-κB作用探讨[A];第十一次全国中西医结合防治呼吸系统疾病学术研讨会论文集[C];2010年

10 何静;王淑琼;陶国才;鲁开智;;NF-κB表达抑制在丙泊酚保护大鼠肝缺血/再灌注损伤时的作用[A];第十五次长江流域麻醉学学术年会暨2010年中南六省麻醉学学术年会暨2010年湖北省麻醉学学术年会论文集[C];2010年

相关博士学位论文 前10条

1 李成海;核因子NF-κB信号通路模型的建立及其小分子抑制剂山楂酸在肿瘤、免疫中的应用研究[D];华东师范大学;2010年

2 李贤;壳寡糖细胞内的亚定位及其在NF-κB通路、抗肿瘤、成骨分化中的作用[D];暨南大学;2011年

3 李静;白花丹醌抑制NF-κB对人胃癌细胞的作用及机制[D];华中科技大学;2012年

4 唐立海;溃结灵对NF-кB活化的IκBα磷酸化/泛素化的作用机制研究[D];广州中医药大学;2012年

5 丛木林;神经病理性疼痛模型大鼠延髓腹后内侧核NF-κB及下游炎性因子表达的研究[D];山东大学;2010年

6 隋艳波;黄连温胆汤对代谢综合征大鼠NF-κB、PPARα及糖脂代谢调控的干预作用[D];黑龙江中医药大学;2011年

7 汪洋;苏木乙酸乙酯提取物对心脏移植模型大鼠NF-κB及T淋巴细胞凋亡的影响[D];黑龙江中医药大学;2012年

8 王健;牛泡沫病毒通过活化细胞NF-κB信号通路促进其转录及复制[D];南开大学;2010年

9 李娟;NF-κB调控microRNAs对食管鳞癌细胞的生物学作用及机制研究[D];第三军医大学;2012年

10 张洪德;ODN阻断NF-κB信号通路对糖尿病患者外周血树突状细胞发育成熟的影响[D];吉林大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 王守一;放射线对涎腺腺样囊性癌细胞NF-κB-P65蛋白表达与细胞凋亡的影响[D];山东大学;2010年

2 杨素云;益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织炎症因子NF-κB的影响[D];山西医科大学;2010年

3 李轰;Hsp70与NF-κB在兔肺缺血再灌注损伤模型的表达及其意义[D];青岛大学;2010年

4 胡娟;NF-κB decoy ONDs-PBCA纳米粒的制备及评价[D];重庆医科大学;2010年

5 朱连翔;NF纺织集团营销策略诊断[D];郑州大学;2010年

6 李姗姗;七叶皂苷钠体外对大鼠紫外线所致晶状体上皮细胞NF-κB表达的影响[D];兰州大学;2011年

7 李莹莹;超短波和超声波对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和NF-κB的影响[D];中南大学;2011年

8 张志勇;PDTC干预下大鼠急性酒精性肝损伤中NF-κB作用机制的研究[D];延边大学;2010年

9 叶欣;NF-κB信号通路和脑出血后的继发性脑损伤关系的研究[D];浙江大学;2010年

10 陶红;过敏性紫癜发病中NF-κB对树突状细胞的调控与T辅助细胞分化失衡的关系[D];重庆医科大学;2010年

本文编号：2717035