曲古抑菌素A促进炎症牙龈间充质干细胞成骨分化的研究

发布时间：2020-06-22 07:16

【摘要】：目的：本研究探讨炎症微环境下,牙龈间充质干细胞的乙酰化修饰,并观察曲古抑菌素A (Trichostatin A, TSA)体外条件下促进炎症牙龈干细胞的成骨分化能力,为研究牙周炎治疗提供可能的新型治疗药物。方法： 1.牙龈干细胞的体外培养及生物学鉴定选取牙周健康及慢性牙周炎患者的牙龈,采用酶消化法进行原代培养。取生长状况良好的第三代牙龈干细胞,流式细胞仪检测并分析其表面抗原CD146、 CD90、SSEA-4、OTC-4的表达,测定克隆形成率,进行成骨和成脂诱导,分别进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色和油红O染色,检测成骨分化和成脂分化情况。 2. RT-PCR法检测组蛋白去乙酰化酶HDAC1、3、6在健康及炎症牙龈干细胞中的表达,计算相对灰度值并进行半定量分析。 3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对健康和炎症牙龈干细胞成骨分化的影响取第3-5代炎症及健康牙龈干细胞,传代接种至6孔板,待80%融合后加入成骨诱导液中诱导培养,实验组加入含TSA的DMSO使终浓度为100nM,对照组加入等量DMSO。成骨诱导7天进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性分析,诱导21天RT-PCR检测Runx2、OCN、HDAC1、HDAC3、HDAC6mRNA的表达,诱导28天进行茜素红染色、Ca2+浓度定量分析。结果： 1.通过酶消化法获得的人健康及炎症牙龈干细胞,镜下呈巢式生长,细胞排列紧密,周边细胞呈短梭形,体积较小。流式细胞仪检测并分析其表面抗原CD146阳性细胞率49.33%,CD90阳性细胞率90.77%,SSEA-4阳性细胞率54.98%,OTC-4阳性细胞率33.69%。克隆形成率是27%。牙龈干细胞在成骨诱导液的作用下,细胞复层生长,碱性磷酸酶染色可见细胞胞浆蓝染,诱导21天后可观察到钙结节形成,经茜素红染色呈橘红色或红色。在成脂诱导28天可见个别细胞胞浆内出现高强度的折射点,油红O染色呈橙红色。 2. RT-PCR琼脂糖凝胶电泳可见,与健康牙龈组织来源的牙龈干细胞相比,HDAC1、3、6在炎症牙龈组织来源的间充质干细胞表达升高。 3.与对照组比较,加入100nM TSA诱导的实验组,ALP染色,细胞蓝染较强,碱性磷酸酶活性较高；茜素红染色并进行定量分析,钙结节较多；RT-PCR琼脂糖凝胶电泳可观察到OCN、Runx2mRNA表达升高,HDAC1、3、6表达降低。结论： 1.牙龈组织中存在可体外分离培养的间充质干细胞,表达干细胞的标志物CD90、CD146、OCT-4、SSEA-4,具有较高的克隆形成和多向分化能力； 2.人炎症牙龈干细胞中组蛋白去乙酰化酶1、3、6高表达,提示其可能参与牙周炎症反应的基因调控； 3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够增强牙龈干细胞的成骨分化能力,提示TSA可能作为局部药物治疗手段控制牙周炎症反应,促进牙周组织再生。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.42

【参考文献】