构建舌癌干细胞富集模型及癌干细胞相关标志物CXCR4的检测

发布时间：2020-06-27 04:10

【摘要】：目的：以癌干细胞的耐药性为切入点,配合机体环境,进行构建体内环磷酰胺及阿霉素干预舌癌干细胞富集模式的实验研究。建立以提高舌癌干细胞比例的富集模式,期望解决癌干细胞数量少而导致舌癌干细胞实验研究的“瓶颈”问题,并探讨细胞粘附因子受体4(CXCR4)作为舌癌干细胞候选标志的角色。方法：选取舌癌裸鼠移植瘤为研究对象,以化疗药物干预为基本手段,采用体内微环境,建立舌癌干细胞富集模式,主要构建模式如下：建立舌癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,采用阿霉素尾静脉注射,8mg/kg,每周一次；腹腔注射环磷酰胺,100mg/kg,8天为一个周期,连续注射3天,停药5天,肿瘤直径为1.5cm时取材原代培养,并在体连续传代5次。采用实时荧光定量PCR法检测舌癌裸鼠皮下移植瘤各代瘤体CXCR4的表达。结果： 1.裸鼠皮下结节形成的时间随着富集代数的增加而逐渐缩短。阿霉素对照组、环磷酰胺对照组皮下结节形成的平均时间均为11天。Tca8113/ADM TP1+、Tca8113/ADM TP2+、Tca8113/ADM TP3+、Tca8113/ADM TP4、 Tca8113/ADM TP5+皮下结节形成的平均时间分别是11、10、9、7、6天,Tca8113/CTX TP1+、Tca8113/CTX TP2+、Tca8113/CTX TP3+、Tca8113/CTX TP4+、Tca8113/CTX TP5+皮下结节形成的平均时间分别是11、9、7、7、5天。 2. CXCR4的表达在阿霉素对照组和经阿霉素化疗药物富集的各代瘤体组织中相对于内参β-actin的平均△Ct-值分别为(8.071±0.670)、(7.842±0.122)、(7.379±0.131)、(6.711±0.134)、(6.304±0.109)、(4.837±1.229),差异有统计学意义(P0.01)。CXCR4的表达在环磷酰胺对照组和经环磷酰胺化疗药物富集的各代瘤体组织中相对于内参β-actin的平均△Ct-值分别为(8.088±0.671)、(7.649±0.191)、(6.698±0.112)、(5.583±0.360)、(4.667±0.224)、(3.055±0.166),差异有统计学意义(P0.01)。CXCR4在经阿霉素富集的各代瘤体组织相对于对照组的表达强度依次为(1.172±0.661)、(1.613±0.371)、(2.567±0.577)、(3.410±0.638)、(9.381±0.721)；CXCR4在经环磷酰胺富集的各代瘤体组织相对于对照组的表达强度依次为(1.355±0.171)、(2.603±0.473)、(5.677±0.591)、(10.711±0.381)、(32.740±0.189)。结论：裸鼠皮下移植瘤联合化疗药物干预传代,能极大富集舌癌干细胞样细胞。舌癌Tca8113细胞的致瘤性随着阿霉素或环磷酰胺在体干预而逐渐增强。化疗药物干预后CXCR4的表达强度随富集的代数增加而增强,CXCR4可做为舌癌干细胞表面候选的特异相关标志物。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.86

【参考文献】