慢性牙周炎牙龈组织中Caspase-3、8的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

发布时间：2020-06-27 06:47

【摘要】：目的： 研究慢性牙周炎(chronic periodentitis, CP)牙龈组织中细胞凋亡的情况,分析Caspase-3和Caspase-8在慢性牙周炎牙龈组织中的表达和意义,探讨二者的表达与慢性牙周炎牙龈组织细胞凋亡之间的关系,为进一步揭示慢性牙周炎发病及相关组织损伤中的可能机制建立新的诊断和治疗策略,并提供一定的理论基础和实验依据。 方法： 采用HE染色法普通光学显微镜观察23例慢性牙周炎和23例健康牙龈组织石蜡切片中细胞凋亡的发生和形态学变化,并结合透射电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL法)检测慢性牙周炎和正常牙龈组织中细胞凋亡的情况和凋亡指数(apototic index, AI),同时运用免疫组化SP法检测Caspase-3和Caspase-8的表达、分布情况。实验结果采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析,分析各组之间凋亡细胞指数及Caspase-3、Caspase-8的平均光密度和平均灰度值,并对Caspase-3和Caspase-8表达与慢性牙周炎牙龈组织细胞凋亡及两者之间的关系进行相关性分析。 结果： 1、较正常对照组,慢性牙周炎牙龈组织中发现显著的细胞凋亡发生后的特征性形态学变化。 2、TUNEL细胞凋亡指数检测 慢性牙周炎组牙龈组织中可见大量凋亡细胞,而正常对照组偶见少量凋亡细胞。慢性牙周炎牙龈组织中的AI(0.419±0.09),明显高于正常对照组(0.058±0.05)(P0.05)。 3、免疫组化SP法Caspase-3的表达与分布检测 正常对照组仅有少量Caspase-3阳性细胞表达,慢性牙周炎组牙龈组织中Caspase-3平均光密度值(0.56±0.06),显著高于正常对照组(0.29±0.02)(t=19.510,P0.05)；平均灰度值(75.81±10.69),显著低于正常对照组(128.41±4.45)(t=-20.387,P0.05)。和正常组相比,慢性牙周炎组牙龈组织中细胞Caspase-3表达明显增强(P0.05)。 4、免疫组化SP法Caspase-8的表达与分布检测 正常对照组仅有少量Caspase-8阳性细胞表达,慢性牙周炎组牙龈组织中,Caspase-8平均光密度值(0.36±0.02),显著高于正常对照组(0.29±0.01)(t=16.381,P0.05)；平均灰度值(110.69±4.18),显著低于正常对照组(131.75±3.39)(t=-17.673,P0.05)。和正常组相比,慢性牙周炎组牙龈组织中细胞Caspase-8表达明显增强(P0.05)。 5、慢性牙周炎牙龈组织中Caspase-3和Caspase-8阳性表达与细胞凋亡的关系 慢性牙周炎患者牙龈组织中Caspase-3、8的阳性表达与AI呈正相关,各组间有统计学意义(P0.05)。 6、慢性牙周炎Caspase-3和Caspase-8表达的相互关系 统计学分析显示,慢性牙周炎牙龈组织中Caspase-3和Caspase-8的阳性表达互不相关,平均光密度比较(r=0.173,P=0.479,P0.05);平均灰度值比较(r=0.407,P=0.054,P0.05)。 结论： 1、慢性牙周炎牙龈组织中细胞凋亡显著增加,表明细胞凋亡异常与慢性牙周炎的发生有一定关系。 2、凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8在慢性牙周炎牙龈组织中呈阳性表达,并且与AI呈正相关,表明Caspase-3和Caspase-8与慢性牙周炎牙龈组织细胞的凋亡关系密切,二者介导的死亡受体凋亡途径可能参与了慢性牙周炎的发病过程。 3、慢性牙周炎牙龈组织中Caspase-3和Caspase-8的表达互不相关,提示细胞凋亡信号传导途径中除Caspase-8介导的死亡受体信号传导途径激活Caspase-3外,可能还存在其他凋亡途径。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R781.4
【图文】：

2结果2.1HE染色镜下形态学观察普通光学显微镜下可见，正常牙跟组织上皮层和固有层结缔组织结构基本正常，上皮钉突呈锯齿状，多而细长并较深地插入固有层中。固有层有大量致密的结缔组织，连续清晰，有少量炎性细胞浸润，胶原纤维排列整齐，极少发生充血、水肿等现象(图1)。细胞形态正常，细胞核规整，染成均一蓝色(图2)。慢性牙周炎牙龋组织中可见鳞状上皮轻度增厚、水肿，部分发生糜烂，上皮钉突明显增生、延长，严重者呈弓形吻合或呈网状。固有层中有大量慢性炎性细胞浸润，主要以大量淋巴细胞、浆细胞为主，多围绕小血管呈灶性分布，胶原纤维排列紊乱，部分发生断裂，毛细血管扩张充血，内皮细胞轻度肿胀(图3)。凋亡细胞在上皮层组织中单个散在分布，表现为细胞变圆、变小，细胞核固缩、碎裂，染色变深呈蓝黑色。(图4)。

图3.慢性牙周炎牙酿组织IIE染色(HE，x1OO)Fig.3HEstaininginthegingivaltissuesofchroniePeriodontitis图4.慢性牙周炎牙豁组织HE染色(1」E，x400)Fig.4HEstaininginthegingivaltissuesofehroniePeriodontitis(HE，X100)(HE，X400).2透射电子显微镜细胞超微结构观察牙靓组织细胞透射电子显微镜超微结构观察可见:正常牙酿组织的细胞结构完整，核形规则，胞膜完整，染色质散在分布于细胞核内，线粒体、内质网、高尔基复合体形态结构规整，无肿胀扩张，未见空泡结构(图5)。慢性牙周炎牙跟组织中可见细胞凋亡早期，细胞核染色体发生边集，电子密度增强，在细胞核膜周边聚集形成新月形，核无固缩(图6);随之染色体发生固缩，核形不规整，核膜表面凹凸不平;细胞核发生碎裂，在细胞浆内可见多个电子密度增强的核碎片(图7);细胞皱缩，细胞核固缩变小，核膜内陷，其内的细胞器轻度增生，线粒体数目增加并伴肿胀扩张，内质网变疏松与胞膜融合，形成空泡结构;在凋亡的晚期，可见部分胞膜卷曲、褶皱，形成膜包裹内有较完整的细胞器和细胞核碎片的致密的凋亡小体(图8)。

【参考文献】

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本文编号：2731466