脐带间充质干细胞与牙髓细胞共培养对LPS诱导细胞炎症因子表达的影响

发布时间：2020-06-30 22:38

【摘要】：目的研究人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)和人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)在不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下细胞因子白介素6(IL-6),白介素10(IL-10),肝细胞生长因子(HGF)的mRNA相对表达量变化。建立hDPCs和hUCMSCs共培养体系,比较共培养组与各对照组细胞因子mRNA及蛋白水平表达的变化,初步探究共培养体系对细胞炎症因子的调控作用。方法(1)分别用0μg/mL,1μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,50μg/mL浓度的LPS细胞培养液培养hUCMSCs和hDPCs,于6h,12h,24h,36h,通过MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,QRT-PCR)检测细胞因子IL-6,IL-10,HGF的mRNA表达水平变化。(2)用含有10μg/ml LPS的细胞培养液培养DPCs,UCMSCs和共培养体系,于6h,12h,24h,36h,MTT法检测细胞增殖,QRT-PCR及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-6,IL-10,HGF的mRNA表达及蛋白水平变化。结果(1)LPS对牙髓细胞和脐带间充质干细胞增殖、炎症因子mRNA表达的影响:(1)10μg/mL浓度组细胞量高于对照组(P0.05),20μg/mL,50μg/mL浓度组细胞量低于对照组(P0.05);UCMSCs四个时间点不同浓度组细胞量无统计学差异(P0.05);(2)10μg/mL,20μg/mL,50μg/mL浓度组IL-6,IL-10,HGF mRNA相对表达量在一定时间内比对照组表达量高(P0.05);1μg/mL浓度组mRNA相对表达量与对照组表达量无统计学差异(P0.05)。(2)LPS对人脐带间充质干细胞和牙髓细胞直接共培养体系中细胞增殖、炎症因子表达的影响:(1)6h,12h,36h时,共培养脂多糖组细胞量高于DPCs脂多糖组(P0.05),与UCMSCs脂多糖组无统计学差异;(2)共培养脂多糖组IL-6 mRNA相对表达量低于DPCs脂多糖组,高于UCMSCs脂多糖组(P0.05);(3)12h,24h,36h时,共培养脂多糖组IL-10,HGF mRNA相对表达量高于DPCs脂多糖组,低于UCMSCs脂多糖组(P0.05)。(4)共培养脂多糖组mRNA IL-6/IL-10值与IL-6/HGF值低于DPCs脂多糖组(P0.01);(5)DPCs脂多糖组、共培养脂多糖组IL-6蛋白水平高于DPCs对照组(P0.01);36h时,共培养脂多糖组IL-6蛋白水平低于DPCs脂多糖组(P0.01);(6)DPCs脂多糖组IL-10,HGF蛋白水平高于DPCs对照组(P0.05);共培养脂多糖组IL-10,HGF蛋白水平显著高于DPCs脂多糖组(P0.01);(7)DPCs脂多糖组蛋白水平IL-6/IL-10值与IL-6/HGF值高于DPCs对照组(P0.01),共培养脂多糖组IL-6/IL-10与IL-6/HGF值低于DPCs脂多糖组(P0.01),且在一定时间范围内与DPCs对照组无统计学差异(P0.05)。结论(1)LPS浓度为10μg/mL时可促进DPCs增殖、且引起细胞因子IL-6,IL-10,HGF表达发生显著变化,综合评价选择该浓度进行后续实验;(2)共培养体系可促进细胞增殖、抑制促炎因子IL-6表达、促进抑炎因子IL-10和HGF的表达,并降低IL-6/IL-10值与IL-6/HGF值。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R78
【图文】：

图 1-1：DPCs 和 UCMSCs 细胞形态Fig1-1:Cellular morphology of DPCs and UCMSCsA DPCs 对照组（×40）B DPCs 脂多糖组（×40）C UCMSCs 对照组（×40）

图 2-1：DPCs 和 UCMSCs 共培养细胞形态A 共培养对照组（×40）B 共培养脂多糖组（×40）Fig2-1:Cellular morphology of DPCs co-culture with UCMSCs

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本文编号：2735920