变形链球菌耐氟菌株eriC~F基因差异性表达及其意义

发布时间：2020-07-01 02:53

【摘要】：实验目的:龋病是口腔中常见病、多发病,而变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是目前公认的致龋力最强、检出率最高的致病菌之一。氟化物因为既能抑制牙体硬组织脱矿,促进其再矿化,又能抑制变形链球菌等致龋菌的生长和代谢,而被广泛添加到口腔卫生产品中。然而,耐氟菌株的出现不仅降低了氟化物的防龋、抗龋作用,也干扰了口腔内微生态系统的正常结构及运行。通过对细菌氟抗性机制的研究,人们提出变形链球菌中存在氟离子逆向运输蛋白EriCF,属于F-/H+逆向转运蛋白。对氟离子有特异的识别运输功能,将氟离子运出到细菌细胞外,来减弱氟离子对细菌的毒副作用。变形链球菌中的EriCF蛋白是由两个串联的同源基因编码产生,在GenBank中基因标记为SMU_1289c和SMU_1290c。然而,目前对于氟抗性增强的变形链球菌耐氟菌株UA159-FR中关于氟抗性相关基因及编码蛋白的研究尚少。因此,作为一种与龋病发生和发展密切相关的氟抗性相关蛋白,进一步研究变形链球菌耐氟菌株中EriCF蛋白的作用和深入探索氟抗性增强的机制,对于口腔医学领域的研究和发展具有重要的意义。实验方法:本实验通过克隆表达变形链球菌耐氟菌株UA159-FR中er.iCF1及eriCF2基因,构建重组大肠杆菌,并绘制重组大肠杆菌在不同NaF环境下的生长曲线,探究变形链球菌耐氟菌株UA159-FR中eriCF1及eriCF2基因的差异性表达与大肠杆菌氟抗性的关系。实验结果:1、本实验成功克隆并表达了变形链球菌耐氟菌株UA159-FR中eriCF1及er.iCF2基因,同时构建了含有目的基因的重组大肠杆菌;2、在大肠杆菌crcB基因存在的情况下,eriCF1组和eriCF2组菌株不论在高氟环境下(3.0 g.L-1,2.5 g.L-1)还是低氟环境下(2.0 g.L-1,1.5 g.L-1),菌液终浓度及生长速度均高于KZ组(P0.01),且eriCF2组菌液终浓度高于eriCF1组(P0.05);3、与原代大肠杆菌BL21相比,eriCF1和eriCF2的导入不仅都能增强细菌的氟抗性能力,而且eriCF2的氟抗性能力较eriCF1强;实验结论:1、变形链球菌耐氟菌株中eriCF1和eriCF2基因均与细菌的抗氟能力有关。2、来自不同菌属的氟抗性相关蛋白可以出现氟抗性叠加效应。3、EriCF1与EriCF2蛋白与氟制剂联合应用可以抑制变形链球菌的生长与繁殖。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R780.2
【图文】：

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本文编号：2736198