基质细胞衍生因子-1趋化细胞归巢诱导牙髓再生的实验研究

发布时间：2020-07-01 05:54

【摘要】：目的:无髓根管内应用基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)进行再生性牙髓治疗或体内局部应用抗SDF-1抗体来中和牙髓血运重建过程中产生的SDF-1,以研究SDF-1在再生性牙髓治疗中的作用。方法:1.60只8周龄SD大鼠,双侧下颌第一磨牙作为实验牙,去髓建立无髓根管模型。2.实验牙的处理方法为:(1)建立无髓根管模型;(2)根尖损伤刺激出血;(3)根管内植入SDF-1α水凝胶;(4)下颌第一磨牙前庭沟局部注射SDF-1血清抗体。实验分为5个组,每组12只SD大鼠。根据上述方法对不同组别的实验牙采取单一或组合方式处理,分别为:刺激出血组(Group Blood Clot,BC组)、刺激出血+SDF-1α水凝胶组(Group Blood Clot+SDF-1α,BC+SDF-1α组)、SDF-1α水凝胶组(Group SDF-1α,SDF-1α组)、刺激出血+抗SDF-1抗体中和作用组(Group Blood Clot+SDF-1 Neutralizing Antibody,BC+antiSDF-1组)。设对照组,实验牙仅建立无髓根管模型。3.样本收集和检测:每组12只大鼠根据上述分组处理后,分别在14天和30天将大鼠过量麻醉处死,每个时间点6只大鼠。取左右两侧下颌骨进行组织学标本处理,进行HE(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色,对根管内新生组织进行定性和定量分析。结果:HE染色组织学表现(1)对照组:根管内去髓后不进行任何处理,14天和30天根管内未见新生结缔组织,根尖孔附近可见少量炎症细胞,根尖区牙周膜内的细胞无从根尖孔向根管内延伸的趋势。(2)实验组HE染色组织学表现14天组织学表现:BC组、BC+SDF-1α组和SDF-1α组根管内冠部均可见大小不一不规则的矿化基质,根管内根尖方向为成纤维细胞样细胞和少量小血管组成的较致密的结缔组织,以上3组根尖区牙周膜内的细胞明显地呈现从根尖孔向根管内延伸的趋势,BC+SDF-1α组和SDF-1α组新生结缔组织内小血管较BC组更丰富;BC+antiSDF-1组中有2个样本根管内未见新生结缔组织,根尖区牙周膜内的细胞从根尖孔向根管内延伸的趋势消失,大量幼稚的成纤维细胞和丰富的小血管聚集在根尖孔处,未进入到根管内,其余样本组织学表现与BC组相似。30天组织学表现:各实验组根管内以及根尖区牙周膜内组织学表现基本相似,根管内冠方为大量大小不一的不规则矿化基质,根管内根尖1/3处为成纤维细胞样细胞和极少小血管组成的较为致密的结缔组织,形态类似于牙周韧带样结构,根管内的结缔组织通过根尖孔连接到牙周韧带。(3)实验组IHC染色组织学表现14天IHC染色组织学表现:BC组、BC+SDF-1α组和SDF-1α组根管内有表达CXCR4阳性细胞,BC+antiSDF-1组根管内未见表达CXCR4阳性细胞。所有实验组根尖区牙周膜内均可见表达CXCR4阳性细胞。30天IHC染色组织学表现:BC组和BC+SDF-1α组根管内有表达CXCR4阳性细胞,SDF-1α组根管内全为矿化组织,无表达CXCR4阳性细胞,BC+antiSDF-1组根管内未见表达CXCR4阳性细胞。所有实验组根尖区牙周膜内均可见表达CXCR4阳性细胞。(4)根管内新生组织面积比值的统计学分析14天时,BC组、BC+SDF-1α组和SDF-1α组根管内新生组织面积比值的平均值均高于BC+antiSDF-1组,但各实验组间的差异无统计学意义(p0.05)。30天时,BC组、BC+SDF-1α组和SDF-1α组根管内新生组织面积比值的平均值均高于BC+antiSDF-1组,各实验组间的差异有统计学意义(p0.05)。组间进行两两比较时,BC+SDF-1α组高于BC组和BC+antiSDF-1组(p0.05),SDF-1α组高于BC+antiSDF-1组(p0.05)。结论:1.SDF-1α能趋化表达CXCR4的细胞归巢进入根管参与组织再生,在一定程度上增加牙髓血运重建术后根管内的新生组织量。2.局部应用抗SDF-1抗体能阻止表达CXCR4阳性的细胞归巢到根管内参与牙髓组织新生。3.SDF-1α/CXCR4信号轴在趋化细胞归巢进入根管进行组织再生中具有重要作用。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R78
【图文】：

过程图,根管,模型建立,大鼠

SDF-1α 组为单独于根管内植入复合 100ng/ml SDF-1α 的水凝胶 1后行 MTA+流动树脂双重充填封闭开髓孔。BC+antiSDF-1 组，在根管封药后第 5 天，即行牙髓血运重建处理前天开始，每天于实验牙前庭沟处局部注射 10ug/10ul 抗 SDF-1 抗体 10u实验牙使用 15#H 锉超出根尖孔旋转 3 周刺激和损伤根尖周组织，血到达髓室并未凝固前向根管内注入 10ug/10ul 的抗 SDF-1 抗体 1ul，15#K 锉将抗体液输送到达根管内，静置等待抗体作用 5min 后行 MT流动树脂双重充填封闭开髓孔，术后即刻于实验牙前庭沟局部注10ug/10ul 的抗 SDF-1 抗体 10ul，术后连续 2 天每天进行实验牙前庭沟局注射 10ug/10ul 的抗 SDF-1 抗体 10ul。实验操作过程如图 1-2 所示，验技术路线如图 1-3 所示。

模型建立,根管,第二次,大鼠

图 1-2 SD 大鼠无髓根管模型建立成功后第二次实验操作过程Figure 1-2 The procedures of second experiment after the successful establishment of the SD rat non-vitaroot canal models

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