小鼠牙本质涎磷蛋白cDNA克

发布时间：2020-07-01 06:38

【摘要】：牙本质矿化的分子机制尚不清楚。目前己知的是牙本质磷蛋白(dentinphosphoprotein，DPP)和牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)是唯一由成牙本质细胞合成和分泌的两种牙本质特异性非胶原蛋白，分泌至矿化前沿，起着启动牙本质矿化以及调节羟基磷灰石晶体的大小和生长速度的作用。大鼠DPP和DSP cDNA已分别被克隆和特征。近来关于牙本质特异性蛋白的一个重要进展是发现DPP和DSP是由单一基因，命名为牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein，DSPP)基因编码的同一转录模本的表达产物。但是否存在一个完整的牙本质涎磷蛋白，尚需要在蛋白水平加以证实。本研究针对上述问题，采用分子生物学技术，对牙本质涎磷蛋白cDNA进行了克隆，原核表达和纯化，并制备了抗牙本质涎磷蛋白的抗体，进行了蛋白印迹(Western blot)和免疫组化的研究，从蛋白水平和分子水平探讨了牙本质涎磷蛋白的组织表达特异性，为获得有活性的牙本质涎磷蛋白及其功能研究奠定了基础。实验分为三部分：1．小鼠牙本质磷蛋白和牙本质涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析；2．小鼠牙本质涎磷蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化；3．小鼠牙本质涎磷蛋白抗血清的制备及其组织表达特异性研究。一．小鼠牙本质磷蛋白和牙本质涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析采用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总RNA，用Oligo(dt)作引物逆转录合成牙胚cDNA，然后利用PCR方法，从cDNA中扩增出小鼠DPP、DSPPcDNA基因片段(约1.6 kb和3.0kb)，将所得基因片段插入pBluescript Ks(pBS)质粒载体，转化到大肠杆菌XL1-Blue，挑选阳性克隆，提取重组质粒DNA，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。所用引物为根据国外文献报道的大鼠DPP cDNA和小鼠DSPP cDNA序列进行设计的，具有良好的准确性和重复
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1999
【分类号】：R78
【图文】：

示意图,牙本质形成,成牙本质细胞,合成前期

第四军医大学博士学位论文文角义回顾是特殊的矿化组织，由矿化的硬组织包括组成。牙本质构成牙齿的主体，由细胞和的形成，主要基于如下假说(图)l:成牙，即前期牙本质，被转运至矿化前沿，然开始形成。在此过程中，成牙本质细胞不胞浆突起，即成牙本质细胞突，与成牙本

牙本质,脱钙液,脱钙,胶原蛋白

图2不同形式的DPP在7.5%SDS一APGE中的分析等四认为MP、LP与FPIZ是同一蛋白不同磷酸化的表现形成和磷酸化程度方面均与HPZ不同，提示可能存在着多PP的分离和纯化世纪60年代中期，人们在纯化牙本质胶原蛋白过程中发现牛、大鼠以及人牙本质中提纯DPP的方法。由于DPP合，因此，只有在牙本质脱钙后方能提纯。牛牙本质中DPP。Kuboki等[3’]发现钙离子可使DPP发生特异性沉淀，地将游离型DPP和结合型DPP分别从牙本质脱钙液、。具体步骤如下:

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