紧密连接蛋白在碘染色确定的口腔鳞状细胞癌粘膜边界的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖迁移作用的研究

发布时间：2020-07-02 01:47

【摘要】：目的:对比分析在口腔鳞状细胞癌粘膜边界紧密连接蛋白表达与碘的上皮内渗入情况,筛选上皮通透性直接相关蛋白,并探讨该蛋白对口腔鳞癌细胞增殖迁移作用的影响。方法:采用免疫组化法对收集的20例口腔鳞状细胞癌标本中紧密连接蛋白claudin-1,2,3,4,5,6,7,8,10,11,14,17,23以及ZO-1,ZO-2,occludin等相关蛋白在口腔鳞癌粘膜边界及深部肿瘤组织的表达进行分析,并对比口腔鳞状细胞癌粘膜边界上皮内碘的渗入区域及糖原的分布情况,初步确定可能的渗透性相关紧密连接蛋白。Western blot检测上述各可能相关蛋白在HSC-3、HSC-4、SAS、Ca9-22、TCA-8133、CAL-27细胞株中的表达水平,最终确定具体细胞紧密连接相关蛋白和理想细胞株。构建携带该蛋白靶向基因的慢病毒载体转染癌细胞,实时荧光定量PCR检测转染后细胞中mRNA表达下调水平。MTT法、细胞划痕实验观察分析转染对细胞增殖和迁移能力的影响。结果:1.紧密连接蛋白claudin-1,4,6,7,8,10,occludin,ZO-2在口腔鳞状细胞癌粘膜边界均出现不同程度的表达,claudin-2,3,5,11,17,23,ZO-1在口腔鳞状细胞癌粘膜边界未见表达,claudin-1在所有病例中均明显表达。其中claudin-1,4,7,8,10表达主要分布在口腔鳞癌粘膜边界正常侧上皮基底及副基底细胞层,异常侧上皮则大多分布于表层下方甚至基本全层表达。碘在口腔鳞癌粘膜边界上皮层内的分布与糖原的分布不完全一致,与claudin-1,4,7,8,10的分布形态基本形成“互补”,其中claduin-1与碘的分布“互补”形态最为一致。2.claudin-1在HSC-3、HSC-4、SAS、CAL-27细胞株中均有明显的表达,在Ca9-22、TCA-8113细胞株中表达水平低。相对于HSC-4细胞,SAS细胞有更高的感染效率。3.MTT实验及细胞划痕实验显示转染claudin-1 siRNA后SAS细胞增殖及迁移能力明显低于未转染细胞(P0.05)。结论:1.claudin-1是一个可靠的、用于辨别口腔鳞癌粘膜边界的分子标志物。2.claudin-1可能参与调节上皮通透性变化而影响活体染色剂在口腔上皮的渗入并影响活体染色剂的口腔鳞癌粘膜边界辨别效果。3.claudin-1的下调降低口腔鳞状细胞癌细胞的增殖及迁移能力,表明claudin-1的表达水平与肿瘤的生物学行为密切相关,是一个潜在的口腔鳞状细胞癌治疗靶点。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8
【图文】：

口腔鳞癌,碘染色,标本

图 1 口腔鳞癌标本的获取Fig.1 obtainment of OSCC sample(A) before iodine stain (B) after iodine stain, iodine-negative area is cancerous part and iodine positivarea is normal mucosa part. The white circle shows the incisional site. (C) surface view of OSCC sampleclaudin-1 claudin-2 claudin-3 claudin-4claudin-5 claudin-6claudin-7claudin-8claudin-10claudin-11 claudin-17 claudin-23occludin ZO-1 ZO-2碘染色HE PAS

口腔鳞癌,标本制备,标本,糖原

研究论文附图图 1 口腔鳞癌标本的获取Fig.1 obtainment of OSCC sample(A) before iodine stain (B) after iodine stain, iodine-negative area is cancerous part and iodine positivearea is normal mucosa part. The white circle shows the incisional site. (C) surface view of OSCC sample染色前染色后标本制备A B Cclaudin-1 claudin-2 claudin-3 claudin-4claudin-5 claudin-6

【参考文献】