种植体周有益菌和可疑致病菌连续培养的动态研究

发布时间：2020-07-02 04:17

【摘要】：[目的] 研究种植体周有益菌和可疑致病菌的生长曲线,细菌间相互作用,通过改良现有的恒化器,设计出能构建种植体周围炎龈下菌群生物膜体外模型的新型恒化器,进行生物膜基本生物量的测定以及结构的观察,为种植体周围炎的微生物替代疗法提供理论依据。 [方法] 实验选用血链球菌(Streptococcus sanguis, S.s)作为有益菌,牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, P.g)、中间普氏菌(Prevotella intermedia, P.i)作为可疑致病菌,分为细菌生长曲线的测定、抑菌实验、细菌连续培养及生物膜形态的观察三个部分。实验一分五组,第一组：单菌P.g,第二组：单菌P.i,第三组：单菌S.s,第四组：双菌P.g+S.s,第五组：双菌P.i+S.s,测量其生长曲线,确定细菌的对数生长期。实验二分三组,第一组：P.g+S.s,第二组：P.i+S.s,每组均设空白对照,钛片用微弧氧化处理模拟种植体表面,通过抑菌实验,观察细菌间相互作用。实验三分四组,第一组：单菌P.g,第二组：单菌P.i,第三组：双菌P.g+S.s,第四组：双菌P.i+S.s,安装种植体周围炎龈下菌群生物膜体外模型恒化器,连续培养72h,分别在24、48、72h时,通过活菌计数对各组钛片生物膜进行基本生物量的测定,通过扫描电镜、激光共聚焦显微镜、荧光显微镜对各组钛片生物膜进行结构的观察。 [结果] 1.生长曲线代表细菌的生长速度：一组(单菌P.g)四组(双菌P.g+S.s)三组(单菌S.s)二组(单菌Pi)五组(双菌P.i+S.s)。细菌的对数生长期：一组2-8h,二组4-18h,三组12h,四组4-12h,五组4-8h。细菌的最大吸收峰：一组28h,二组12h,三组12h,四组22h,五组12h。 2.抑菌实验中,两组空白对照均无抑菌圈产生,一组(P.g+S.s)及二组(P.i+S.s)有抑菌圈产生,并且抑菌圈直径随S.s浓度的增加而增大,在S.s浓度1.0×108CFU/mL时达到最大值,相同浓度S.s,一组的抑菌圈直径总是大于组。 3.钛片表面生物膜活菌计数结果,各组在相同时间点,菌落数10-2CFU/mL10-3CFU/mL10-4CFU/mL,各组在相同浓度时,菌落数72h48h24h。同一时间点相同浓度时,菌落数一组(单菌Pg)三组(双菌P.g+S.s),二组(单菌Pi)四组(双菌P.i+S.s)。 4.钛片表面生物膜扫描电镜观察,各组菌斑量随时间的延长而增加。一组与二组的菌斑生物膜形态学观察无明显差异,三组与四组的菌斑生物膜形态学观察无明显差异,而前两者与后两者之间形态学却有明显的差异,三组较一组在同一时间点生成的菌斑量少,四组较二组在同一时间点生成的菌斑量少。 5.钛片表面生物膜激光共聚焦显微镜、荧光显微镜观察,生物膜厚度在5.92-30.52μm之间。各组生物膜厚度随时间的延长而加厚,荧光显微镜下,细菌呈蓝绿色荧光,CLSM下,细菌呈蓝色荧光,视野中球菌呈链状排列并与团片状细菌交织在一起,周围有散在的单个球菌。 [结论] 1.细菌生长曲线表明,培养8h后,各组细菌均进入对数生长期,这为后续实验提供了理论依据。 2.抑菌实验以及细菌连续培养后CFU菌落计数均表明, S.s对P.g、P.i的生长有抑制作用。 3.扫描电镜探测生物膜表面形态表明,S.s混合培养对P.g、P.i生物膜的形态有影响。 4.激光共聚焦显微镜测量生物膜的厚度表明,厚度随时间增加而持续增厚,同一时间点各组细菌在钛片表面形成的生物膜厚度明显不同,S.s混合培养对P.g、P.i生物膜厚度有影响。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R783

【参考文献】