CK19和抑癌基因PTEN在口腔鳞癌中的表达研究

发布时间：2020-07-04 11:38

【摘要】： 目的：口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤,其发病率占口腔癌的80%,且近来发病率有上升的趋势。口腔鳞癌的恶性程度高,而且难以早期及时发现,容易延误治疗时机,从而影响预后。肿瘤标志物检测是近年来发展起来的一项肿瘤诊断的新手段,对于早期诊断有着独特的作用,成为了肿瘤学中引人注目的新领域,它反映了癌的发生、发展过程及肿瘤相关基因的激活或失活程度。有研究表明,选择一些特异性较高的肿瘤标志物联合检测某一肿瘤,要优于单一指标的诊断。细胞角蛋白19(cytokeratin 19, CK19)为Ⅰ型角蛋白,主要表达于单层上皮的上皮细胞,也散在表达于复层鳞状上皮的基底细胞,癌组织中CK19的异常表达可作为癌的辅助诊断和鉴别诊断指标。CK19在口腔黏膜癌变过程中随病变程度加重其表达增加,可作为诊断OSCC分化程度的辅助指标。抑癌基因PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因),该基因的突变失活与人类多数恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关,是第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,并与组织学类型、病理分级有关。本实验采用免疫组化SP法检测CK19和PTEN在不同类型口腔鳞癌(包括癌及癌旁组织)中的表达,分析CK19和PTEN在鳞癌组织中的表达,以探讨CK19和PTEN在口腔鳞癌发病机制中的意义,以期为临床应用提供依据。 方法：收集我院口腔鳞癌患者手术切除癌组织标本20例,年龄36-78岁,平均年龄56.25±11.60岁,术前未接受放、化疗。按照WHO口腔鳞癌组织分型标准(Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ级,即高、中、低分化),并切取相应的癌旁组织20例；对照组(无全身系统性疾病,排除可能干扰本实验结果的口腔疾患)15例,为唇裂修补术中切除的多余唇组织、口腔外伤患者修整创缘的唇颊部黏膜组织或拔除阻生牙时切除的覆盖阻生牙牙龈组织,年龄3月-67岁,平均年龄56.23岁,组织用4%的中性甲醛固定液固定24小时,石蜡包埋,做4um厚的连续切片。用兔抗人CK19多克隆抗体以及兔抗人PTEN多克隆抗体,采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)进行免疫组化染色。CK19以细胞核或细胞浆中出现明显的黄色或者棕黄色颗粒为阳性染色：-：阴性；±：阳性细胞在基底层或占基底上层的25%以下；+：阳性细胞占基底上层的25%-50%；++：阳性细胞占基底上层的50%-75%；+++：阳性细胞占基底上层的75%以上。PTEN表达的阳性部位在细胞核或者胞浆,按每张切片选取5个高倍视野,每个视野计数100个细胞。计算各个视野中的阳性细胞的平均百分率作为该阳性细胞的百分率。将阳性细胞的比例分为5级：阳性细胞数≤5%为0分；6%-25%为1分；26%-50%为2分；51%-75%为3分；75%为4分。阳性强度分为4级：不着色为0分；黄色为1分；棕黄色为2分；黄褐色为3分。两项得分相乘,按照分数分为4个等级,即0-1分为(-),2-4分为(+),5-8分为(++),9分以上为(+++)。最后做统计学分析,得出结论。所有分析均使用SPSS13.0统计软件。结果：1.在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中CK19阳性率分别为13.33%(2/15)、50.00%(10/20)、85.00%(17/20),差异有统计学意义(X2=20.9 P0.05)。在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中PTEN阳性率分别为100%(15/15)、70%(14/20)、35%(7/20),差异有统计学意义(X2=11 P0.05)。2.CK19的表达强度在正常口腔组织、癌旁组织和OSCC中表达逐渐增高,其中正常组织与癌旁组织(X2=5.12 P0.05),癌旁组织与癌组织(X2=5.58 P0.05),正常组织与癌组织(X2=15.21 P0.05)差异均有统计学意义。在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中PTEN阳性率分别为100%(15/15)、70%(14/20)、35%(7/20),其中正常组织与癌组织(X2=5.43 P0.05),癌旁组织与癌组织(X2=4.91P0.05),正常组织与癌组织(X2=13.30 P0.05)差异均有统计学意义,不表达或者低表达见于分化程度差的低分化恶性肿瘤。3.CK19的表达与oscc临床病理学分级(X2=4.3 P0.05)及TNM分期(X2=6.5 P0.05)有关,与年龄、性别及肿瘤大小无关(P0.05)。PTEN的表达与OSCC临床病理学分级(X2=7.21 P0.05)有关,而与TNM分期无关、年龄、性别及肿瘤大小无关(P0.05)。4.CK19随OSCC分化程度降低表达逐渐增高,PTEN随OSCC分化程度降低表达逐渐减少,两者呈负相关(P0.05)。 结论：1.CK19和抑癌基因PTEN表达异常可能是口腔鳞癌产生的机制之一,与口腔鳞癌的发生及发展有关。2.CK19的表达增加及PTEN的表达减少或缺失与口腔鳞癌的组织病理学分级有关。3.CK19的表达异常与口腔鳞癌TNM分期有关,而抑癌基因PTEN的表达异常与口腔鳞癌TNM分期无关。4.对它们联合检测有利于提高口腔鳞癌早期诊断的灵敏度和特异性。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R739.8
【图文】：

PTEN在正常口腔组织中的表达(A100‘B200x)

PTEN在口腔鳞癌组织中的表达(A，C100XB，DZo0X)

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本文编号：2741076