颅神经嵴干细胞的体外分离培养及其成牙分化诱导研究

发布时间：2020-07-07 06:12

【摘要】：本课题结合牙胚发育生物学、干细胞生物学及组织工程技术的有关研究成果和方法,探索性地分离培养牙胚发生的上游干细胞—颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell, CNCSC),并以其为种子细胞,进行成牙本质样细胞表型分化的定向诱导,旨在确立CNCSC用于牙再生的可行性,为进一步开展功能性牙组织工程研究奠定理论和方法学基础。 颅神经管组织块无血清条件培养法分离培养CNCSC,形态学、BurdU渗入及免疫荧光细胞化学等方法鉴定其生物学性状及干细胞特征。原代培养的CNCSC形态上呈梭形成纤维样细胞,特异性标记物HNK-1阳性表达;表现为克隆样生长、自我更新以及在不同诱导条件下出现多向分化能力等干细胞特征。本实验成功地获取CNCSC,并呈现多潜能干细胞的生物学性状,为研究其牙向分化诱导确立细胞学基础。 无血清条件培养法培养颅神经管组织块,通过Hoxa2原位杂交及vimentin免疫荧光细胞化学染色鉴定细胞分化表型。结果发现,迁出前颅神经嵴细胞在100ng/ml FGF8作用下,呈现第一鳃弓外胚间充质细胞表型分化,呈现Hoxa2阴性表达而vimentin阳性表达。本实验证实,FGF8可诱导CNCSC向第一鳃弓外胚间充质细胞表型分化,且具有早期诱导时相性特征,为进一步诱导其牙向分化提供理论及实验
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R78
【图文】：

圈ZcCNCSC特异性标记物刚K一1阳性表达(免疫细胞化学荧光x200)图3acNCSc的体外生长曲线图3bCNCSc的自我更新能力，表现为胞核摄取BudrU后检测阳性图3cCNCSC形成的克隆(相差显微镜x100)

6一9天增殖速度减慢进入平台期，细胞生长曲线呈S形(图3)a。CNCSC经BurdU孵育后，免疫细胞荧光化学标记呈胞核阳性，BurUd被大多数细胞摄取，参与胞核DNA的合成代谢(图3b)，说明cNCSc具有较强的自我更新能力。传代后2天见细胞呈集落样生长，1Xl扩细胞密度在14天后可形成20个左右克隆(图3c)。2.4NCCSC的多向分化CNCSc经血清及BMPZ诱导后出现明显分化，形态改变显著，呈细长神经样细胞(图4)a;7天后可见细胞呈多突起树枝状，14天后见突起进一步分枝变长，并交互连接呈网状(图b4)。NCcCS经血清及矿化液诱导后由原来的梭形转变成不规则多角形，胞体铺展明显，胞浆丰满，呈骨样细胞(图4c)

参与胞核DNA的合成代谢(图3b)，说明cNCSc具有较强的自我更新能力。传代后2天见细胞呈集落样生长，1Xl扩细胞密度在14天后可形成20个左右克隆(图3c)。2.4NCCSC的多向分化CNCSc经血清及BMPZ诱导后出现明显分化，形态改变显著，呈细长神经样细胞(图4)a;7天后可见细胞呈多突起树枝状，14天后见突起进一步分枝变长，并交互连接呈网状(图b4)。NCcCS经血清及矿化液诱导后由原来的梭形转变成不规则多角形，胞体铺展明显，胞浆丰满，呈骨样细胞(图4c)，随着诱导时间的延长，细胞重叠生长，矿化结节形成并逐渐融合(图4d)，诱导后20天茜素红染色?

【引证文献】

相关博士学位论文 前1条

1 朱锋;小鼠牙本质涎磷蛋白基因转染诱导成体间充质干细胞牙向分化的实验研究[D];四川大学;2006年

本文编号：2744755