大鼠颌下腺放射性损伤修复中SSB1表达变化及其与NBS1相关性研究

发布时间：2020-07-18 02:12

【摘要】：目的:研究单链DNA结合蛋白1(single-stranded DNA-binding protein1,SSB1)在大鼠颌下腺(submandibular gland,SMG)组织及上皮细胞放射性损伤修复中mRNA及蛋白表达的变化规律,探讨SSB1与DNA双链断裂(double-strand breaks,DSB)损伤修复的关系;并初步探讨大鼠颌下腺DSB损伤修复中SSB1与NBS1的变化关系及相互作用。方法:1.SD大鼠~(60)Coγ放射性损伤模型建立,用Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)检测大鼠颌下腺组织正常对照组与照射12Gy放射剂量后不同时间点(1、2、3、4、5、6、7、8小时)组中SSB1基因mRNA的表达;用qRT-PCR、免疫印迹(western blot,WB)分别检测鼠颌下腺组织正常对照组与不同放射剂量(3、6、9、12、15Gy)组SSB1mRNA及蛋白表达。2.体外培养SMG上皮细胞,用qRT-PCR检测正常对照组与不同放射剂量(1、2、4、6、8Gy)组大鼠SMG上皮细胞SSB1mRNA的表达;用WB同时检测正常对照组与不同放射剂量(1、2、4、6、8Gy)组大鼠SMG上皮细胞SSB1及NBS1蛋白表达。3.构建大鼠rAdE5-SSB1-1p2shRNA重组腺病毒,并进一步转染大鼠SMG上皮细胞(rAd-shRNA组),增设空白质粒对照组(rAd-HK组)及空白对照组(control组),通过WB法检测SSB1沉默效果及NBS1蛋白表达情况。4.进一步使用大鼠rAdE5-SSB1-1p2shRNA重组腺病毒转染SMG上皮细胞,沉默SSB1基因表达后,照射不同放射剂量(0、6Gy)后分为rAd-shRNA、rAd-shRNA+IR组,另设单纯照射6Gy组(Irradiation,IR组)及空白对照组(control组),用WB检测SSB1及NBS1蛋白表达情况。结果:1.大鼠颌下腺组织经~(60)Coγ12Gy放射剂量照射后,随着时间的延长,SSB1mRNA的相对表达量先增高后逐渐减低,于4h组达到高峰,p0.05,差异有统计学意义;~(60)Coγ不同放射剂量照射后,随着放射剂量的增高,SSB1 mRNA、蛋白的相对表达量先增高后减低并皆于9Gy放射剂量组达到峰值,p0.05,差异有统计学意义。2.不同放射剂量照射后大鼠SMG上皮细胞SSB1基因mRNA表达随剂量的增加而增加,在2Gy组达到最高峰,随后逐渐下降;SSB1、NBS1蛋白表达量皆随着照射剂量的增加先增加后降低,在2Gy组达到高峰;p0.05,差异有统计学意义。3.WB分析结果表明,rAd-shRNA组SSB1、NBS1蛋白相对表达量均较rAd-HK组、control组显著降低,差异均有统计学意义(均p0.05);rAd-HK组与control组比较,均p0.05,差异无统计学意义。4.沉默SMG上皮细胞SSB1基因后,rAd-shRNA+IR组及rAd-shRNA组NBS1基因蛋白表达量与control组相比皆出现下调,p0.05,差异有统计学意义;而IR组SSB1、NBS1蛋白相对表达量较control组高,p0.05,差异有统计学意义。结论:在大鼠颌下腺组织及SMG上皮细胞放射性损伤修复中SSB1基因mRNA及蛋白表达无剂量依赖性,其表达量随放射剂量的增加先增加后降低;成功沉默大鼠SMG上皮细胞SSB1基因,SSB1沉默可下调NBS1蛋白表达,二者存在协同关系。在大鼠颌下腺放射性损伤修复中,SSB1可能是DSB修复通路信号启动的钥匙。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781.7
【图文】：

图3-160Coγ12Gy放射后不同时间点大鼠颌下腺组织SSB1mRNA相对表达量re3-1 The relative expression of SSB1 mRNAin submandibular gland tissues after iGy dose注：* 与对照组比较，p<0.05,有统计学意义Coγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织 SSB1mRN变化剂量升高SSB1mRNA的相对表达量先增高后减低，放射剂mRNA相对表达量达最高。行单因素方差分析，p<0.05，。组间两两比较，6、9、12Gy放射组与对照组比较，p<学意义。表 3-260Coγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织 SSB1mRNA 相对表达量he relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissues after irradiat

图3-260Coγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织SSB1mRNA相对表达量ure3-2 The relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissues afterdifference doses注：* 与对照组比较，p<0.05,有统计学意义oγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织SSB1蛋白表剂量升高SSB1蛋白相对表达量先增高后减低，放射剂量白相对表达量达最高，行单因素方差分析，p<0.05，差异有间两两比较，6、9、12Gy放射组与对照组比较，p<0.05，义。

图3-260Coγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织SSB1mRNA相对Figure3-2 The relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissudifference doses注：* 与对照组比较，p<0.05,有统计学意义3.360Coγ不同放射剂量照射后大鼠颌下腺组织SSB1蛋随着剂量升高SSB1蛋白相对表达量先增高后减低，放射SB1蛋白相对表达量达最高，行单因素方差分析，p<0.05，义；组间两两比较，6、9、12Gy放射组与对照组比较，p<计学意义。

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本文编号：2760255