应用体外实验探讨新型磷镁晶须对口腔鳞癌的生长及凋亡的作用

发布时间：2020-07-18 16:46

【摘要】：目的:尽管目前的癌症治疗方法不断的进步,但是癌症患者经过治疗,如手术、术后辅助放疗、联合放化疗及放疗和靶向治疗等,不良反应仍令患者困扰痛苦。化疗被用作转移性患者的姑息疗法,对于癌症仍需要开发新的合理的疗法。新型磷镁晶须具有优秀的力学性能、弹性模量,在材料的增强补韧、抗菌、成骨、载药等生物医学领域都有广泛应用,但目前在抑癌方面研究仍显不足。本研究通过一系列体外实验,评价不同浓度的新型磷镁晶须混悬液对舌鳞癌(Tca8113)细胞和小鼠成纤维(L-929)细胞的生长和凋亡的影响,对口腔鳞癌的治疗进行探索性研究。研究方法:1、将磷镁晶须配制成1600ppm、1400ppm、1200ppm、1000ppm、800ppm这6组不同质量浓度的稀释混悬液,在孔板上进行两种细胞的接种和培养。2、采用CCK8法评价各组晶须对Tca 8113细胞和L-929细胞增殖的影响,计算相对增殖率以及进行细胞毒性分析。3、倒置显微镜下观察各组细胞形态学上的变化。4、通过FCM PI单染检测两种细胞周期水平,探究晶须浓度对其周期分布的影响。并对结果进行统计分析。5、通过FCM AnnexinV FITC/PI双染检测晶须浓度对Tca 8113细胞和L-929细胞凋亡的影响。结果:1、CCK8结果表明随晶须浓度增大两种细胞增殖率减小,抑制率增大。当晶须浓度小于1200ppm时,对L-929细胞无毒性;晶须浓度小于1000ppm时对TCA8113细胞无毒性。所以晶须浓度为1200ppm时讨论晶须抑癌性。2、从细胞形态学变化上观察,Tca 8113细胞经不同刺激处理24h后,倒置显微镜下观察发现,晶须浓度1200ppm开始细胞形态变圆,细胞核浓缩,细胞凋亡。晶须浓度1400ppm、1600ppm时有细胞细胞膜破裂,有可能出现坏死。3、FCM测细胞周期结果,Tca 8113细胞实验组晶须浓度1200ppm组的细胞周期阻滞于G1期,G1期的细胞所占比例与对照Empty vector组相比明显增大,而S期细胞比例明显减小。说明此浓度晶须使Tca 8113细胞周期由G1期向S期转化过程受到抑制,细胞周期进程缓慢。而L-929细胞实验组1200ppm与其照组相比,G1期与S期几乎没有明显改变。4、FCM测AnnexinV FITC/PI双染实验结果显示晶须浓度1200ppm时与阴性对照组相比,Tca 8113细胞早凋明显增多,L-929细胞几乎无影响。把Tca8113早期凋亡的细胞数目转化为柱状图,其所占的百分比高达69.6%。结论:晶须浓度在1200ppm时,可以最优抑制舌鳞癌癌细胞生长,诱导癌细胞凋亡,将癌细胞周期阻滞于G1期。而对正常体细胞生长、凋亡影响较弱。新型磷镁晶须对口腔鳞状细胞癌的防治是值得继续探索的领域。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8
【图文】：

变化图,变化图,细胞,浓度

-929细胞OD值随共培养时间变化图（CK为空白对照组，n=3）

变化图,细胞,变化图,浓度

图 2 Tca 8113细胞 OD值随共培养时间变化图（CK 为空白对照组，n=3）*：Tca 8113 细胞，与其余各浓度组之间相比，P<0.001。下观察

晶须,悬浊液,荧光显微镜,细胞

度晶须悬浊液处理 TCA8113细胞 24h后，荧光显微镜下细胞形态学变组 ck b 800ppm c 1000ppm d 1200ppm e 1400ppm f 1600ppm。bar=50 μ胞仪检测结果混悬液对细胞周期的影响用 FCM 对晶须处理细胞后进行细胞周期的检测，分析结果实验组晶须浓度 1200ppm 组的细胞周期阻滞于 G1 期，G1 期明显增大，而 S 期细胞比例明显减小（如图 4）我们由此推

【参考文献】