TRPA1、TRPV1与TMEM100三种蛋白在人成牙本质细胞中共表达的研究

发布时间：2020-07-19 15:37

【摘要】：目的:瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)通道是神经纤维以及具有感知功能细胞发挥感觉作用的关键分子之一。瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)通道常参与疼痛,热和化学感觉。TMEM100跨膜蛋白参与调控TRPV1和TRPA1通道蛋白。已有研究报道TRPA1和TRPV1通道在HODs(Human odontoblasts,HODs)细胞表达。目前尚未见HODs细胞是否表达TMEM100跨膜蛋白的相关报道。实验从细胞水平对人成牙本质细胞是否表达TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白进行研究,观察TRPA1、TRPV1和TMEM100三种蛋白在HODs中的表达情况和分布特点,分析在HODs上TRPA1、TRPV1和TMEM100三种蛋白是否共表达,有助于更深入地了解牙髓感觉传导机制。方法:1.收集就诊于天津医科大学口腔医院口腔颌面外科18-25岁患者,因阻生和正畸等原因新鲜拔除的完整健康的第三磨牙,进行固定,配制乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)脱钙液对牙齿进行脱钙处理、石蜡包埋和近远中向切片,通过普通苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色确定组织切片质量。2.通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测牙本质涎磷蛋白抗体(Dentin sialophosphoproteins,DSPP)和巢蛋白(nestin)的表达情况,鉴定并定位成牙本质细胞(odontoblasts,ODs)层,检测TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs表达的情况,使用光学显微镜及图像系统采集不同部位ODs的图片观察其在ODs层分布特点。3.采用多标记免疫荧光染色(immunofluorescence,IF),基于抗原、抗体特异性结合的原理,借助不同的荧光染色燃料标记,多轮循环染色来判断TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs上的表达部位及共定位关系,应用多光谱成像、信号分拆技术和成像分析软件测量细胞内的染色定位,并根据染色光密度和在单个细胞基础上的染色进行定量分析。结果:1.显微镜下,普通HE染色显示切片各组织细胞的形态完整清晰,为后续的IHC染色研究奠定实验基础。2.IHC染色结果证实在人牙髓组织切片不同部位ODs细胞均有DSPP及nestin阳性表达,并与HE染色的ODs细胞组织学位置一致。TRPA1通道蛋白在HODs细胞胞体及细胞突起均明显呈阳性表达。TRPV1通道蛋白在HODs细胞胞体及近细胞突起明显表达,TMEM100蛋白主要在HODs细胞胞体和细胞突起呈弱阳性表达。3.多标记IF染色显示,同一切片同一视野下,在HODs细胞层中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表达。在ODs细胞胞体和突起,三者表达部位具有高度重叠区域,且三者相关关系分析显示,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三个变量之间存在显著的强相关。结论:1.IHC研究结果表明TRPA1和TRPV1通道蛋白在HODs细胞胞体及细胞突起均明显呈阳性表达。TMEM100蛋白主要在HODs细胞胞体和细胞突起呈弱阳性表达。2.多标记IF染色研究表明部分HODs细胞胞体及突起中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表达,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三个变量之间存在显著的强相关。提示HODs细胞上TRPA1和TRPV1、TMEM100蛋白可能共表达并相互作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R78
【图文】：

H&E染色（×200）

DSPPIHC染色（×200）

nestin IHC 染色（×200）

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 周怡君;刘苍维;闫广兴;王爽爽;叶佳朋;张雪;胡月;郝新青;史册;孙宏晨;;活化蛋白A受体1在成牙本质细胞极化和牙本质形成中的作用[J];口腔颌面外科杂志;2019年06期

2 Wang HS;Yang FH;Wang YJ;赵泽亮;;成牙本质细胞外泌体减轻邻近细胞凋亡[J];中国口腔颌面外科杂志;2019年06期

3 赵颖煊;赵守亮;唐荣银;吕海鹏;闫晶;侯锐;;人成牙本质细胞L型钙离子通道特异性基因片段的克隆研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年04期

4 宋玮,赵守亮,石勇,何文喜;人成牙本质细胞的分离和鉴定[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2005年02期

5 崔春,陈智;基膜及其相关分子在成牙本质细胞分化中的作用[J];国外医学.口腔医学分册;2004年01期

6 王晓春,梁景平;成牙本质细胞分离技术的新进展[J];国外医学.口腔医学分册;2004年06期

7 李明伟;李鹏;陈博;白玉;程庚;薛云鹏;肖敏;余擎;;脂多糖对成牙本质细胞细胞连接影响的体外研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2014年04期

8 姜永;肖明振;杨帆;何文喜;范晓敏;;成牙本质细胞中成纤维细胞生长因子18的表达[J];中国临床康复;2006年37期

9 王捍国,肖明振,赵守亮,郝建军,张进;永生化人成牙本质细胞样细胞系的建立[J];第四军医大学学报;2003年10期

10 王发生;;钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达[J];中国民康医学;2016年17期

相关会议论文 前10条

1 吕海鹏;赵守亮;史俊南;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因的原核表达质粒的构建和鉴定[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年

2 田卫东;谢家敏;刘磊;汤炜;郑晓辉;李声伟;;人类牙乳头间充质细胞向成牙本质细胞定向诱导分化的实验研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年

3 裴斐;;自噬调节成牙本质细胞分化及牙本质形成[A];2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编[C];2019年

4 郝玉庆;王国荃;刘开泰;;过量氟对培养人牙乳头间充质细胞合成分泌Ⅰ型胶原的影响[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年

5 朱晓茹;赵守亮;唐荣银;张蓉;李玉成;;人牙切片器官培养模型的建立[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年

6 贺丹;吴丽更;阙克华;;内源性大麻素AEA调控HODs细胞分泌MMP-2的机制[A];第十次全国老年口腔医学学术年会论文汇编[C];2015年

7 谢家敏;田卫东;陈希哲;郑晓辉;汤炜;刘磊;;体外诱导人牙乳头间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年

8 陈智;;成牙本质细胞分化的调控机制—Klf4及其表观遗传因子的作用[A];2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2014年

9 占云燕;裴斐;陈智;;HDAC6通过调控自噬体与溶酶体融合影响自噬过程参与成牙本质细胞分化[A];2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编[C];2019年

10 郝新青;周怡君;胡月;刘苍维;闫广兴;王爽爽;史册;孙宏晨;;极性蛋白PAR3在小鼠下颌磨牙成牙本质细胞中的表达浅析[A];2019年中华口腔医学会口腔病理学专业委员会第十三次全国口腔病理学术会议论文汇编[C];2019年

相关重要报纸文章 前2条

1 洪亚兰;厌食蔬菜对健康的危害[N];医药养生保健报;2007年

2 记者 杨念明　通讯员 龙华 实习生 文金汇;我省5个课题入选国家973前期专项[N];湖北日报;2010年

相关博士学位论文 前10条

1 万春燕;基质金属蛋白酶-9在小鼠根尖周炎/牙周炎中的作用以及牙本质涎蛋白调控成牙本质细胞分化的研究[D];武汉大学;2015年

2 贾杰;Dspp突变打破小鼠成牙本质细胞分化过程的矿化平衡机制研究[D];武汉大学;2016年

3 刘钊;HDAC抑制剂LMK-235对DPCs成牙本质细胞向分化的作用及机制的研究[D];南方医科大学;2017年

4 李霞;TRAF6对成牙本质细胞功能的调控作用的研究[D];第四军医大学;2005年

5 姜永;成纤维细胞生长因子18对成牙本质细胞分化的作用及信号传导通路的研究[D];第四军医大学;2006年

6 陈新梅;甲状旁腺激素对牙乳头间充质细胞、组织影响的实验研究[D];第四军医大学;1998年

7 李玉成;组织工程化牙根组织的研究[D];第四军医大学;2007年

8 何文喜;Smads信号分子在成牙本质细胞分化中作用的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

9 黄欣;成牙本质细胞分化中microRNA靶向调控牙本质涎磷蛋白基因的研究[D];南方医科大学;2011年

10 韩娜娜;β-catenin在牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化过程中的作用机制研究[D];武汉大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 王瑜;TRPA1、TRPV1与TMEM100三种蛋白在人成牙本质细胞中共表达的研究[D];天津医科大学;2019年

2 文静;N-花生四烯酸氨基乙醇调控人成牙本质样细胞MMP-2表达相关miRNA的研究[D];天津医科大学;2019年

3 谢金芳;Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后的修复作用[D];吉林大学;2019年

4 袁芳;SLPI在成牙本质细胞分化中的作用和机制研究[D];昆明理工大学;2018年

5 李媛;FoxO3a调控自噬参与成牙本质细胞炎性损伤修复的机制研究[D];武汉大学;2018年

6 宋玮;人成牙本质细胞的分离和鉴定[D];第四军医大学;2005年

7 吴煜;过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞超微结构的影响及免疫组化的研究[D];广西医科大学;2005年

8 赵颖煊;人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆研究[D];第四军医大学;2008年

9 段晴月;骨髓间充质干细胞分化为成牙本质细胞的体内研究[D];第四军医大学;2010年

10 朱晓茹;人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基对牙本质矿化的影响研究[D];第四军医大学;2007年

本文编号：2762610