犬乳恒牙替换期血管内皮生长因子的表达及意义

发布时间：2020-07-21 09:53

【摘要】： 动物牙齿及颌面部生长发育的重要阶段包括乳恒牙替换,其中有乳牙根、牙槽骨的吸收,恒牙胚的发育和恒牙萌出等一系列复杂的生理过程[1]。乳恒牙替换是儿童口腔中的正常生理现象,其中萌出通道的形成,牙槽骨的改建以及乳牙根的吸收,是牙齿正常萌出和替换的先决条件,在这些过程中破骨细胞(OC)起着重要作用,它不仅参与吸收乳牙根、牙槽骨等组织,还为恒牙胚的发育和萌出开辟道路[2]。但其机制至今不明,因此研究破骨细胞的激活、分化、成熟及表达等生物学特性对了解和调控乳恒牙的萌出有重要意义。 血管内皮生长因子(VEGF)是由血小板、巨核细胞、内皮细胞和成骨细胞或肿瘤细胞合成和分泌的多功能细胞素,是一种由亚基内及亚基间二硫键交联形成的同源二聚体糖蛋白。VEGF是一类高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,具有促进内皮细胞增殖、血管生成、增加血管通透性以及血管维持等功能。VEGF既是主要的血管形成因子,又是骨生长因子,与骨代谢关系密切。VEGF能明显提高大鼠成骨细胞活性、增强其迁移、增殖、分化并加速其骨形成[3]。VEGF可促进破骨细胞分化,维持骨髓功能,且达到类似于巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的作用。许多研究表明,VEGF在骨代谢过程中协调着骨细胞的消长、细胞外基质的改建、血管增生及骨形成、骨吸收间的关系。本研究采用细胞培养、免疫组织化学、原位杂交、图像分析等方法,观察了体外培养大鼠破骨细胞中VEGF表达情况,以及犬乳恒牙替换过程中乳牙牙根稳定期、乳牙根吸收期、恒牙列期三个阶段的乳牙牙根、牙槽骨中的破牙细胞、破骨细胞和恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞中VEGF的表达情况。初步探讨VEGF在乳恒牙替换期和体外培养破骨细胞中所起的作用。主要研究内容及结果如下: 第一部分犬乳恒牙替换期VEGF表达的研究 分别采用免疫组化和原位杂交方法,观察犬乳牙根稳定期、乳牙根吸收期和恒牙列期中VEGF的表达染色情况。 1.犬乳牙牙根稳定期:犬乳牙牙根尚未发生生理性根吸收,乳牙根周围牙槽骨未见吸收陷窝。恒牙胚处于牙冠发育阶段,恒牙胚牙本质、牙釉质基质开始形成。此时VEGF在牙槽骨的破骨细胞、成骨细胞免疫组化及原位杂交染色阳性,提示VEGF可能参与破骨细胞的分化、成熟,参与犬乳牙牙根稳定期的骨质改建。恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞VEGF免疫组化及原位杂交染色也为阳性,推测VEGF可能参与恒牙胚的发育过程。 2.犬乳牙牙根吸收期:犬乳牙牙根发生生理性吸收,乳牙根面可见多数吸收陷窝,呈蚕食状,陷窝中可见多核破牙细胞。牙囊周围及接近牙胚的牙槽骨陷窝可见多核破骨细胞。恒牙胚冠部牙本质、牙釉质进一步形成和矿化。此时可见VEGF在乳牙根吸收面的破牙细胞、牙槽骨中的破骨细胞、成骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞免疫组化染色阳性,其中破骨细胞染色为强阳性,提示此期VEGF蛋白表达增强,以促进牙槽骨和乳牙根的吸收。破骨/破牙细胞原位杂交结果为强阳性,成骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞原位杂交结果阳性,提示此期破骨细胞分泌、合成VEGF功能增强。 3.犬恒牙列期:乳牙脱落,恒牙萌出。牙槽骨破骨细胞免疫组化及原位杂交染色弱阳性,染色灰度值均显著增加,提示破骨细胞VEGF分泌量明显减少,牙槽骨处于骨质改建较弱的时期。 第二部分体外培养大鼠破骨细胞VEGF表达的研究 分别采用免疫组化和原位杂交方法,观察体外培养大鼠破骨细胞VEGF表达的情况。 实验取大鼠长骨骨髓,采用骨髓诱导培养方法,培养体系中加入1,25(OH)2D3、IL-1β诱导破骨细胞分化,进行细胞培养,倒置显微镜观察破骨细胞形成情况。细胞培养6d后可见有多核巨细胞形成。取原代培养9d后的细胞爬片进行破骨细胞特征性染色鉴定,出现抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,并且与细胞共同培养的骨片上出现吸收陷窝,即为破骨细胞样细胞。取所培养的破骨细胞样细胞进行VEGF免疫组化和原位杂交染色,结果均为阳性,证实体外培养大鼠破骨细胞中有VEGF蛋白和mRNA的表达,提示VEGF可能参与破骨细胞的分化与成熟。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R78
【图文】：

域的长度约为14kb。外显子1-5编码的区域可能含有识别受体KDR/FLK-1和FLT-1的区域，该区域存在于所有种类的VEGF中，外显子8编码的氨基酸也存在于所有种类的VEGF中（见下图1）。各种VEGF之间的差别主要在于是否存在由VEGF基因外显子6和7编码的肽链。图1 人VEGF五种异构体的剪接示意图1.2 蛋白结构VEGF是胱氨酸结生长因子超家族一员，是通过两对链间二硫键共价连接的反平行同型二聚体。VEGF单体N端8-109位氨基酸残基形成的二级结构

图 2 OC 分泌酸（H+，Cl-），致使骨组织脱矿1.6.4 VEGF 与其它骨生长因子间的关系VEGF与BMP及TGF-β的关系 骨形成蛋白(BMPs)属于转化生长因子

TNF等[39，40，41]（见下图3）。OPG图3 骨髓基质细胞/OB在各种激素、因子的分别作用下形成OC不同的促进骨吸收因子其信号转导方式也不尽相同，主要分为3类:通过维生素D3受体转导的信号[1,25(OH)2D3]；通过蛋白激酶A途径转导的信号[PTH、IL-1、PGE]以及通过gp130转导的信号[IL-6、IL-11等]。但骨组织培养

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王兴强,杨富生,葛前进;双因子对体外培养大鼠破骨细胞的诱导作用[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2003年11期

本文编号：2764253