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富血小板血浆促进骨组织修复的实验研究

发布时间:2020-07-22 06:44
【摘要】:目的: 本研究通过对富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)制备方法的改进,制备获得含有高浓度血小板的富血小板血浆,并检测其中的TGF-β1等生长因子浓度;体外原代培养人成骨细胞并传代,从细胞水平探讨富血小板血浆对人成骨细胞增殖的影响;建立兔颅骨实验性骨缺损,动物实验骨形成水平探讨其促进骨组织修复的能力;为PRP临床应用于口腔颌面部骨缺损修复提供更多资料。 方法:本研究分为3个部分 1.对PRP传统制备方法进行改进,分别用传统法和改良法制备得到PRP,通过血常规分析、ELISA法测定TGF-β 1浓度和无菌试验,比较两方法制备PRP的有效性和稳定性 2.原代培养人成骨细胞并传代,将其与PRP来源的人血清共同培养,以PPP来源的人血清和不含任何血清的细胞培养基作为对照,通过MTT比色法检测人成骨细胞的增殖情况,探讨其对体外培养人成骨细胞增殖的影响。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R782.4
【图文】:

示意图,分离装置,示意图,注射器


四川大学华西口腔医学院博士学位论文第一部份图1一1一2改良PRP分离装置示意图.2.4建立并标准化改良法制备PRP和PPP操作常规,如图1一1一3所示,具体步骤如下:2.4.1.用预置有1.3nliACD一A抗凝剂的注射器采集10ml抗凝静脉血,去掉注射器推杆后按图1一1一1所示组装成为改良的离心装置;.24.2.离心装置以360Xg离心20mni,使红细胞沉降于底部,血浆一红细胞界面清晰;.24.3.根据离心后红细胞一血浆界面,设定加载装置下降距离,160xg离心1而n,利用离心力在保证界面稳定的情况下推动注射器活塞分离出沉降于下部的红细胞,注射器内保留上部的血浆及靠近界面111甘n的红细胞。.24.4.颠倒注射器,sooXg离心20而n;2.4.5.用另一注射器吸取转移上部血浆进入另一离心管中

血浆,传统法,红细胞,界面形成


塞排出底部红细胞,此时,注射器中保留约1mm厚的红细胞层,红细胞一血浆界面基本保持第一次离心后状况,其上部血浆仍然较混浊,靠近界面的血浆呈微红色,如图1一1一8所示;.23第二次离心后,血浆淡黄色,清澈透明,在注射器底部约1~红细胞层上可见白膜层,如图1一1一9所示;利用另一支注射器由上及下缓缓吸取上部血浆,保留白膜层上Zmm血浆层,白膜层未受到激惹,保持完整稳定;静置30mni后,轻轻振荡,可使沉淀的细胞成分重悬得到PRP,肉眼无明显聚合成分;2.4吸去的上部血浆转移进入离心管中,制备PPP同前。图1一l一4制备得到的PRP和PPP图1一1一5传统法第一次离心后血浆一红细胞界面形成

红细胞,薄层,传统法,第二次


图1一l一6传统法第二次离心后血小板沉积在薄层红细胞上图1一l一7改良法第一次离心后血浆一红细胞界面形成图1一1一8改良法排除大部分红细胞,保留界面下约In”n红细胞层第二次离心后血小板沉积在薄层红细胞上图l·l一传统法第二次离心后血小板沉积在薄层红细胞上

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本文编号:2765462

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