静压力及钙网蛋白对人牙龈成纤维细胞表达TGF-β1的影响

发布时间：2020-08-14 22:11

【摘要】：目的:1.探究在静压力作用下,不同作用时间点的人牙龈成纤维细胞(HGFs)表达钙网蛋白(CRT)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的情况。2.探究shRNA基因沉默HGFs中CRT的表达后,HGFs中TGF-β1的表达变化情况,分析CRT对HGFs中TGF-β1表达的影响,以初步研究CRT在人牙龈纤维化转导信号通路中的作用机制。方法:1.组织块培养法培养出原代HGFs,经传代纯化后,取第4-6代HGFs接种在聚乳酸-乙醇酸聚合物(PLGA)支架上,建立HGFs-PLGA支架复合培养模型从而构建三维培养模式。2、采用重物加载法对已构建成功的复合培养模型加载25g/cm~2的力,按加力时间分为0h,6h,24h,48h,72h组,对照组为0h(未加力)组。通过实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测各加力组CRT、TGF-β1的基因相对于未加力组的表达情况,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各加力组CRT、TGF-β1的蛋白相对于未加力组的表达量。3.构建重组腺病毒rAdE5-CRT1p2-shRNA,用重组腺病毒转染第4代的HGFs,以沉默HGFs中CRT的表达,CCK-8法检测腺病毒转染对HGFs增殖能力的影响。转染72h后,使用荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白表达量,并计算转染效率;并采用RT-qPCR、Western Blot技术检测基因沉默效率。4.采用RT-qPCR、Western Blot技术检测沉默HGFs中CRT的表达后,TGF-β1的mRNA及蛋白的表达情况。结果:1.组织块培养法成功培养出原代HGFs,传代顺利,并完成HGFs-PLGA支架复合培养模型的构建。2.随着加力时间的延长,HGFs中CRT、TGF-β1的基因和蛋白的表达量升高,在24h升到最高,随后逐渐降低。3.转染72h后,沉默组转染效率达到88.101±0.058%,阴性对照组转染效率达到88.359±0.022%。4、CCK-8结果显示,转染组、空白对照组的OD值均随培养时间的延长呈上升的趋势;比较相同天数转染组与空白组的OD值,差异无统计学意义。5、Ad-shRNA组HGFs中CRT、TGF-β1的mRNA和蛋白表达量较空白对照组明显下降,差异有统计学意义。结论:1.静压力可促进HGFs中CRT、TGF-β1的表达,随着加力时间的延长,两者的表达水平均增高,到达峰值后下降。2.CRT对HGFs中TGF-β1的生成有重要作用。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R783.5
【图文】：

图 1-1 HGFs 三维培养重物加载模型Fig1-1 The modified “weight” method for loading compressive force结果置显微镜观察，约 5-15 天可见组织块周边有少量细胞

HGFs 原代培养 40× HGFs 传代培养 40×图 1-2 HGFs 的培养Fig1-2 The culture of human gingival fibroblasts

25图 2-2 静压力对 HGFsTGF-β1 mRNA 表达的影响2 The mRNA expression of TGF-β1 HGFs under compress表示与 0 h 比较，P＜0.05 差异有统计学意义。

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 叶健文;周闯;阎冰;杨佳;傅哲;唐文超;翟文龙;;钙网蛋白基因沉默对人肝癌细胞的增殖及侵袭能力的影响[J];中华肝胆外科杂志;2015年06期

2 郑怡;yだ

本文编号：2793606