MicroRNA-27a在舌鳞癌组织中的表达及对舌鳞癌cal-27细胞增殖与凋亡行为影响的研究

发布时间：2020-08-17 21:18

【摘要】：目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC),简称舌鳞癌,为口腔颌面部常见恶性肿瘤之一,具有恶性程度高、局部复发率高、早期易发生颈部淋巴结转移等表现,预后较差。临床上对舌鳞癌患者多应用以外科手术为主,辅以放疗、化疗或靶向治疗等方法的综合治疗方案。舌为重要的功能器官,多数中、晚期患者行根治性手术后往往造成言语、咀嚼及吞咽等方面不同程度的功能障碍,故“早诊断、早治疗”已逐渐引起临床医师的普遍重视。因此,近年来的研究热点集中于对舌鳞癌中异常表达基因的筛查,以助于舌鳞癌的早期发现和辅助治疗。Micro RNAs为一类非编码单链RNA分子,长度约为20~25 nt,通过与靶基因3’端非编码区完全或者不完全配对,导致目的基因沉默或阻断目的基因的翻译过程来调节基因表达活性,使细胞生物学行为发生改变或导致某些疾病的发生和发展。故本研究拟通过分子及细胞生物学方法探究microRNA-27a在舌鳞癌组织中的表达异常,并分析其对舌鳞癌细胞增殖和凋亡行为的影响。方法:收集2015年9月至2017年9月河北医科大学第四医院口腔颌面外科具有完整病历资料的35例舌鳞癌患者肿瘤组织标本及相应癌旁组织标本。其次,应用RT-qPCR方法分别检测舌鳞癌肿瘤组织标本、相应癌旁组织标本、舌鳞癌cal-27细胞以及人正常组织来源hek-293细胞中microRNA-27a的表达水平。再次,应用脂质体转染法将microRNA-27a inhibitor转染入舌鳞癌cal-27细胞中。进一步分别采用MTS法、Annexin V-FITC(14)PI双染法与流式细胞术检测microRNA-27a对舌鳞癌cal-27细胞活力及凋亡行为的影响。实验数据应用SPSS 21.0软件进行统计分析,均以P0.05为差异具有统计学意义。结果:RT-qPCR结果显示,microRNA-27a在35例舌鳞癌患者肿瘤组织标本中的表达量为癌旁组织的2.81±3.17倍,相比上调,差异具有统计学意义(P0.05)。舌鳞癌cal-27细胞中mi R-27a的表达水平较正常hek-293细胞上调,差异具有统计学意义(P0.05)。通过转染microRNA-27a inhibitor敲低了舌鳞癌cal-27细胞中microRNA-27a的表达,差异具有统计学意义(P0.05)。MTS与细胞凋亡实验结果显示,转染microRNA-27a inhibitor组分别与microRNA-27a inhibitor negative control组和mock组相比,microRNA-27a inhibitor组舌鳞癌cal-27细胞活力降低,凋亡比例增加,差异均具有统计学意义(P(27)0.05)。结论:MicroRNA-27a在舌鳞癌中表达上调,具有促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的功能,在舌鳞癌发生和发展过程中可能发挥癌基因的作用。推测microRNA-27a具有成为新诊治靶点的潜在价值,可为舌鳞癌的早期诊断及完善综合治疗方案提供帮助。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.86
【图文】：

表达水平,舌鳞癌,肿瘤组织,统计学意义

结果1. MiR-27a在TSCC肿瘤组织标本及舌鳞癌cal-27细胞中均表达上调MiR-27a的熔解曲线(图1 D)和扩增曲线(图1 E)显示出RT-qPCR的条件是可靠的。RT-qPCR 结果显示，在 35 例组织标本中有 80.00% (28/35)肿瘤组织中 miR-27a 的表达水平较相应癌旁组织上调(图 1 A)。统计结果表明，miR-27a 的表达水平在肿瘤组织(C)中较癌旁组织(N)上调，为癌旁组织的 2.81±3.17 倍，差异具有统计学意义(P<0.05) (图 1 B)。进一步通过对比舌鳞癌 cal-27 细胞与正常 hek-293 细胞中 miR-27a 的表达水平发现，miR-27a 在舌鳞癌 cal-27 细胞中也呈现表达上调的现象，差异具有统计学意义(P<0.05) (图 1 C)。这些结果表明 miR-27a 在 TSCC 的发生和发展中可能起重要作用。2. 敲低舌鳞癌 cal-27 细胞中 miR-27a 的表达水平可抑制细胞活力在转染实验24h后RT-qPCR结果显示，miR-27a inhibitor组中miR-27a的表达水平较 miR-27a inhibitor NC 组和 mock 组下调

细胞活力,实验检测

图 2 通过 MTS 实验检测低表达 miR-27a 对 cal-27 细胞活力的影响Fig.2 Through MTS assays effects of miR-27a low expression on the ceproliferation of cal-27 were detected.(A) Transfection efficiency of the corresponding miRNAs in the cal-27 ceby RT-qPCR. After transfection, the expression of miR-27a or the contrmiRNAs in the cal-27 cells were monitored using RT-qPCR. (B) Effect miR-27a on the cal-27 cell proliferation measured by the MTS assay. Cal-2cells were transfected with miR-27a or the control miRNAs in the Cal-27 ceand the cell proliferation was detected using the MTS assay.Data weexpressed as the mean ± SD from three independent experiments. P < 0.05 indicated as symbol *.

细胞凋亡

图 3 MiR-27a 对 cal-27 细胞凋亡的影响Fig.3 Effects of miR-27a on the apoptosis of cells cal-27.(A) The flow cytometry assays were performed to detect the cell apoptosis rateof cal-27 cells. (B) Effect of miR-27a on the apoptosis of the Cal-27 cell lines.Cal-27 cells were transfected with miR-27a or the control miRNAs and treatedby Annexin V-FITC PI apoptosis detection kit. The apoptotic percentages ofthe Cal-27 cells in different groups were monitored by flow cytometry.. Datawere expressed as the mean ± SD from three independent experiments.P < 0.05 is indicated as symbol *.

【参考文献】