miRNA-524、IL-33、ST2在成釉细胞瘤中表达及意义
发布时间：2020-08-17 21:24
【摘要】：目的:成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)是一种牙源性肿瘤,发生于颌骨,其具有侵袭性生长和术后易复发的特点。AB的临床表现为生长缓慢的无痛性肿胀,鉴于疾病早期症状不明显且缺乏有效治疗措施,严重影响患者生存质量。近年来研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)与肿瘤密切相关,是肿瘤诊断、治疗及预后判断的潜在靶标。应用生物信息学分析,筛选出在AB中差异性表达的miRNA-524及其相关靶点白细胞介素-33(interleukin,IL-33)。IL-33是白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)家族的成员,在多种类型的细胞中表达。细胞损伤或坏死时释放出具有活性的成熟IL-33,激活免疫系统并提供了损伤信号。IL-33及其受体ST2和IL-1受体辅助蛋白(IL-1 receptor accessory protein,IL-1RAcP)形成IL-33/ST2信号通路。近年来研究表明,IL-33/ST2利用免疫调节、血管生成、肿瘤侵袭和转移等机制,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用。因此,探讨miRNA-524、IL-33和ST2在AB中的表达及临床意义,为寻找AB的新治疗靶点提供科学依据。研究方法:1、应用Human miRNA表达谱芯片技术,筛选与AB相关的差异性表达的miRNA-524,采用茎环法实时定量PCR检测在14例AB及正常口腔黏膜组织(NOM)中的表达情况。2、应用生物信息学方法寻找mi RNA-524的靶点IL-33,采用qRT-PCR检测IL-33的mRNA和统计学分析初步验证其两者相关性。3、应用qRT-PCR和Western Blot在AB及正常口腔黏膜组织中检测IL-33和ST2的表达。4、应用免疫组织化学染色实验方法,在90例AB蜡块和20例NOM组织蜡块中检测IL-33和ST2的表达水平。结果:1、miRNA芯片分析发现,实验组(AB)miRNA表达量与对照组(NOM)比较后,其中变化在2.0倍以上,并且差异有统计学意义(P0.05)的miRNA确定为差异表达的miRNA。miRNA-524在AB组织中比正常组织平均低8.96倍(P0.001),差异最明显。综合生物信息学分析等多重筛选条件,最终确定miRNA-524为下一步研究的miRNA分子,应用茎环法实时定量PCR检测miRNA-524在AB中的表达比NOM低8.19倍(P0.05)。2、应用Spearman相关性分析发现miRNA-524与IL-33在AB中的表达具有负相关性(r=-0.886,P0.05)。3、应用qRT-PCR检测IL-33表达高于NOM1.39倍(P0.05),ST2在AB中的表达是在NOM的1.76倍(P0.05);Western Blot检测IL-33在AB中的表达高于NOM2.75倍(P0.05),ST2在AB中的表达是NOM的2.16倍(P0.05)。4、应用免疫组织化学染色检测IL-33在AB中的表达强度高于NOM,IL-33分布于肿瘤性上皮细胞的细胞核中,间质中炎性淋巴细胞、浆细胞阳性表达,偶见单核细胞阳性染色,内皮细胞、成纤维细胞和骨周边破骨细胞也见表达;ST2在AB中的表达强度也是高于NOM的,ST2分布于肿瘤性上皮细胞的胞质中,间质中炎性淋巴细胞、浆细胞阳性、单核细胞表达,胞核偶见阳性染色,内皮细胞、成纤维细胞和骨周边破骨细胞也见表达。结论:1、miRNA-524在AB中低表达,IL-33可能是与miRNA-524关系密切的潜在靶点。2、与NOM相比,AB中IL-33和ST2的表达增强。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.81
【图文】：
中国医科大学硕士学位论文3. 实验结果3.1 miRNA 芯片结果分析3.1.1 芯片信号分析我们选用的 miRNA 芯片是探针经过 Tm 值均一化后的 LNA 增强探针，数据的可重复性达到 99%并且可探测到信号高达 10E+05 级，覆盖所有在 miRBase18.0 中有注释的的人，小鼠和大鼠的 miRNA，同时也包括和这些物种相关的病毒的 miRNA（图 3.1）。miRNA 芯片信号结果如图 3.2，证明芯片的可信度非常高。
2 miRNA 芯片结果分析图。图 A 为箱图，通过背景消减及探针信号标准化后，组织样本芯片的荧光信号强度一致，排除因信号不一致而导致的错误结果；图 ，可以直观地看到显著性差异的 miRNAs，其中横坐标代表差异倍数，纵坐标代表标记点代表有统计学意义的筛选出的 miRNAs，其中左边红色标记点表示表达下As，右边红色标记点代表上调的 miRNAs；图 C 为散点图，反应了芯片间的重性越好越靠近对角线；图 D 为聚类分析图，x 轴为 12 个组织样本（A1-A6 为 A6 为 NOM 组），y 轴为差异表达的 miRNAs，最上方为系统聚类分析，同一组别离较近，而不同组别之间差异最大。2 筛选差异表达的 miRNA我们将实验组（AB）miRNA 表达量与对照组（NOM）比较后，其中在 2.0 倍以上，并且差异有统计学意义（P<0.05）的 miRNA 确定为差 miRNA。结果发现 miRNA-524 在 AB 中比 NOM 低约 10 倍，差异最
图 3.3 TargetScanHuman7.1 预测 miRNA-524 与 IL-33 结合序列3.2 茎环实时定量 PCR 和实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测结果3.2.1 miRNA-524 的表达情况14 例 AB 标本、14 例 NOM 标本的 cDNA 经 Realtime PCR 扩增获得了miRNA-524 实时荧光 PCR 扩增曲线（图 3.4A）和溶解曲线（图 3.4B）。通过软件7500 Software v2.0.5分析出miRNA-524的CT值，为了校正不同标本之间RNA的质量和逆转录效率的差异，以 2- CT法表示相对定量结果，以 U6 作为内参，2- CT表示实验组目的基因相对于对照组原始拷贝数的倍数差异，即表示目的基因在 AB 和 NOM 之间的表达相对变化。结果如表 3.2 显示：miRNA-524 在 AB中的表达相对于 NOM 低了 8.19 倍，具有统计学意义（P<0.05）（图 3.4C）。表 3.2 miRNA-524mRNA 在不同组织中的相对表达量差异倍数( X ±SD)组织名称 样本数（个） 相对表达量差异倍数 P 值
本文编号：2795854
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.81
【图文】：
中国医科大学硕士学位论文3. 实验结果3.1 miRNA 芯片结果分析3.1.1 芯片信号分析我们选用的 miRNA 芯片是探针经过 Tm 值均一化后的 LNA 增强探针，数据的可重复性达到 99%并且可探测到信号高达 10E+05 级，覆盖所有在 miRBase18.0 中有注释的的人，小鼠和大鼠的 miRNA，同时也包括和这些物种相关的病毒的 miRNA（图 3.1）。miRNA 芯片信号结果如图 3.2，证明芯片的可信度非常高。
2 miRNA 芯片结果分析图。图 A 为箱图，通过背景消减及探针信号标准化后，组织样本芯片的荧光信号强度一致，排除因信号不一致而导致的错误结果；图 ，可以直观地看到显著性差异的 miRNAs，其中横坐标代表差异倍数，纵坐标代表标记点代表有统计学意义的筛选出的 miRNAs，其中左边红色标记点表示表达下As，右边红色标记点代表上调的 miRNAs；图 C 为散点图，反应了芯片间的重性越好越靠近对角线；图 D 为聚类分析图，x 轴为 12 个组织样本（A1-A6 为 A6 为 NOM 组），y 轴为差异表达的 miRNAs，最上方为系统聚类分析，同一组别离较近，而不同组别之间差异最大。2 筛选差异表达的 miRNA我们将实验组（AB）miRNA 表达量与对照组（NOM）比较后，其中在 2.0 倍以上，并且差异有统计学意义（P<0.05）的 miRNA 确定为差 miRNA。结果发现 miRNA-524 在 AB 中比 NOM 低约 10 倍，差异最
图 3.3 TargetScanHuman7.1 预测 miRNA-524 与 IL-33 结合序列3.2 茎环实时定量 PCR 和实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测结果3.2.1 miRNA-524 的表达情况14 例 AB 标本、14 例 NOM 标本的 cDNA 经 Realtime PCR 扩增获得了miRNA-524 实时荧光 PCR 扩增曲线（图 3.4A）和溶解曲线（图 3.4B）。通过软件7500 Software v2.0.5分析出miRNA-524的CT值，为了校正不同标本之间RNA的质量和逆转录效率的差异，以 2- CT法表示相对定量结果，以 U6 作为内参，2- CT表示实验组目的基因相对于对照组原始拷贝数的倍数差异，即表示目的基因在 AB 和 NOM 之间的表达相对变化。结果如表 3.2 显示：miRNA-524 在 AB中的表达相对于 NOM 低了 8.19 倍，具有统计学意义（P<0.05）（图 3.4C）。表 3.2 miRNA-524mRNA 在不同组织中的相对表达量差异倍数( X ±SD)组织名称 样本数（个） 相对表达量差异倍数 P 值
【参考文献】
相关硕士学位论文 前1条
1 张成文;NF-κBp65及Phospho-NF-κBp65在人成釉细胞瘤中的表达及意义[D];中国医科大学;2009年
本文编号：2795854
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2795854.html
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