类淀粉样蛋白诱导羟基磷灰石封闭牙本质小管

发布时间：2020-08-18 15:36

【摘要】：目的:牙本质过敏症是常见的牙体硬组织疾病之一,发作时酸痛难忍,范围可局限或广泛。目前所报道的治疗方法远期疗效不佳,易导致复发。因此,寻找一种简便快捷、效果长期稳定的治疗方法已成为迫切之需。本研究将聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)接枝到溶菌酶(lysozyme)分子上,得到聚乙二醇化溶菌酶(PEGylated lysozyme,lyso-PEG),经还原剂处理后得到类淀粉样蛋白相转化lyso-PEG,并在牙本质小管表面及深部构建相转化lyso-PEG涂层,依靠其表面活性官能团,诱导产生羟基磷灰石封闭牙本质小管。方法:1、首先在溶菌酶分子上接枝PEG,得到lyso-PEG,配制还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(tris(2-carboxyethyl)phosphine,TCEP),等体积混合后得到相转化lyso-PEG溶液。收集因正畸预防性拔除的表面完整无缺损、无龋坏、隐裂、磨损或其他缺损的阻生齿,制备牙本质过敏模型牙片,分为3组:牙本质过敏对照组,相转化lyso-PEG处理组,极固宁(Green Or~(TM))阳性对照组。将牙本质过敏对照组和相转化lyso-PEG处理组牙片放入人工唾液中7天。2、通过飞行时间质谱(MALDI-TOF)检测溶菌酶接枝PEG的结果,激光共聚焦显微镜(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM)下观察相转化lyso-PEG是否能够粘附于牙本质表面及小管内部。通过场发射扫描电镜(Field Emission Scanning Electron Microscope,SEM)、X射线衍射(X-Ray Diffraction,XRD)、能量色散X射线光谱(Energy Dispersive X-ray detector,EDX)等对牙本质小管封闭情况及封闭物的微观结构和表面形貌进行表征。3、体外培养小鼠成纤维细胞(L929),将其定植于经相转化lyso-PEG和相转化溶菌酶改性的牙片表面,用CCK-8细胞活性法评价其生物相容性。通过大鼠动物实验模拟真实口腔环境再次评估相转化lyso-PEG改性后的牙片牙本质小管封闭情况。结果:1、MALDI-TOF图谱表明成功在溶菌酶分子上接枝聚乙二醇,CLSM结果显示相转化lyso-PEG粘附于牙本质表面及小管内部,并深入小管内部约20μm。2、SEM结果显示相转化lyso-PEG改性的牙本质小管被严密封闭,封闭物可进入小管内部超过20μm,而极固宁仅沉积在牙本质表面封闭小管口,未见深入小管内部。XRD及EDX结果提示相转化lyso-PEG诱导形成的封闭物为接近天然牙本质无机成分的羟基磷灰石。3、细胞活性实验证实相转化lyso-PEG具有良好的生物相容性,动物实验模拟真实口腔环境,相转化lyso-PEG能够呈现与体外实验相同的结果,严密封闭牙本质小管并出现良好的抑菌效果。结论:本实验在溶菌酶分子上接枝聚乙二醇,并通过溶菌酶相转化体系形成相转化lyso-PEG,将其作为表面改性方法应用于牙本质表面及小管深部,形成一层稳定的粘附层,并诱导羟基磷灰石形成,封闭牙本质小管。这一过程反应条件温和、简便快捷、成本低廉、封闭物稳定,因此相转化lyso-PEG可以成为诱导封闭牙本质小管的活性物质,而这种类淀粉蛋白表面改性技术有望成为一种新的牙本质过敏症的治疗办法。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R781.2
【图文】：

谱图,溶菌酶,谱图,相转化

图 1：天然溶菌酶和 lyso-PEG 的 MALDI-TOF 谱图。.2 牙本质表面相转化 lyso-PEG 涂层的表征因相转化 lyso-PEG 涂层内部的淀粉样结构可以结合 ThT，CLSM 观察涂层绿色，所以从图 2 可以看出，牙本质表面及牙本质小管内部均有相转化yso-PEG 涂层形成，且根据 3D 照片(图 2a)结果显示涂层粘附于牙本质小管的深可达 20um。图 2b 表示无法被 ThT 染色的牙本质过敏模型表面没有相转化yso-PEG 涂层形成。

牙本质过敏,相转化,牙片,处理组

11牙本质过敏模型、牙本质过敏对照组、相转化 lyso-PEG 处理组和极固een OrTM）阳性对照组 FESEM 及 EDX 结果。a：牙本质过敏模型横截面；过敏模型纵断面；c：牙本质过敏对照组牙片横截面；d：相转化 lyso-PE牙片横截面；e,f：牙本质过敏对照组牙片纵断面，f 为 e 的局部放大；g lyso-PEG 处理组牙片纵断面，h 为 g 的局部放大；i：极固宁（Green OrT照组横截面；j：极固宁（Green OrTM）阳性对照组牙片纵断面；k：相化 lyso-PEG 处理组封闭物 EDX 结果。

牙本质过敏,晶面,相转化,处理组

天津医科大学硕士学位论文可以在衍射图上看到 HAP 晶体的表面特征峰，即在 2θ= 31.8°对应晶面（211），2θ= 32.8°对应晶面（300）小管的牙本质过敏模型组（图 4B），其（002）晶面衍照组中（图 4C），（002）晶面衍射峰仍然较低且 30°-3说明没有形成矿化物。在相转化 lyso-PEG 处理组（图（图 4E）中呈现了相似的谱图，在（002）晶面均出5°范围内的重叠峰分别对应（211）和（300）晶面。

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