MITF在小鼠慢性根尖周炎中的表达研究及典型牙髓疾病临床病例报告
发布时间：2020-08-23 13:05
【摘要】：目的:建立小鼠慢性根尖周炎模型,研究MITF(Microphthalmia-associated Transcription Factor,小眼畸形相关转录因子)在小鼠实验性根尖周炎中的表达情况。方法:选用25只6-8周龄、体重20-22g的C57BL/6J小鼠,采用对小鼠行双侧下颌第一磨牙开髓术后将髓腔暴露于口腔环境的方法,建立小鼠根尖周炎动物模型。分别于开髓后0周、1周、2周、3周、4周各时间点随机处死5只小鼠,其中0周作为正常对照组。行多聚甲醛心内固定,分离下颌骨,组织脱钙,包埋,制备冰冻切片,HE染色观察根尖周炎症进展的病理学变化,确认小鼠根尖周炎动物模型建立成功。用MITF多克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测其表达及分布。酶组织化学染色检测根尖周组织周围破骨细胞的表达以及MITF的表达与破骨细胞表达的相关性。结果:1.HE染色HE染色的结果显示,术后1周,小鼠下颌第一磨牙根尖周可见少量中性粒细胞浸润;术后2周,下颌第一磨牙牙髓全部坏死,根尖周可见大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润;术后3周,炎症浸润范围增大,淋巴细胞增多,牙槽骨出现破坏;术后4周,淋巴细胞持续增多,根尖周牙槽骨、牙骨质出现不同程度的吸收。术后0周即空白对照组小鼠下颌第一磨牙牙槽骨未见破坏,无炎性细胞浸润。HE染色结果显示,成功建立了小鼠根尖周炎动物模型。2.免疫组织化学染色术后1周,下颌第一磨牙根尖周区域有少量MITF阳性细胞;术后2到4周,MITF阳性细胞逐渐增多,在第4周达到峰值。术后0周即正常对照组根尖周组织中有少量MITF阳性细胞。术后1到4周阳性表达数量均高于0周正常对照组,该结果有统计学差异(P0.05)。3、酶组织化学染色术后1周,下颌第一磨牙根尖周区域有少量TRAP染色阳性细胞;术后2周,TRAP染色阳性细胞数量有所增加;术后3周,TRAP染色阳性细胞大量聚集,达到峰值;术后4周,TRAP染色阳性细胞数量明显减少;正常对照组根尖周组织中可见个别TRAP染色阳性细胞。结果具有统计学差异(P0.05)。MITF阳性染色OD值和TRAP阳性细胞计数值具有中度相关性。(r=0.690,P0.01)。结论:MITF在小鼠根尖周炎症中有表达,可能对小鼠根尖周炎症进展及骨破坏起促进作用。但其在根尖周骨破坏及炎症反应的具体的功能作用有待进一步研究。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781.341
【图文】：
单因素方差分析进行各时间点比较，P<0.05为差异具有统计学意义。Pearson相关分析评价MITF阳性细胞OD值及TRAP阳性破骨细胞数间的相关性，P<0.01具有统计学意义。结果1.HE染色100 倍镜下小鼠根尖周组织的 HE 染色结果如图 1 所示，术后 1 周，根尖组织区域出现浆液性渗出，炎性浸润范围较小，可见少量中性粒细胞浸润；术后 2 周，根尖区炎性浸润范围增大，可见大量中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞，牙槽骨和牙骨质吸收；术后 3 周，根尖周炎症反应进一步加重，淋巴细胞逐渐增多，牙槽骨吸收加剧。术后 4 周，根尖周炎症浸润减少，多以淋巴细胞、巨噬细胞等散分布，牙槽骨吸收明显。正常对照组（0 周）根尖周偶有炎性细胞浸润，牙槽骨未见异常。
2.免疫组织化学染色MITF免疫组化染色结果如图2所示，为400倍镜下各时间点小鼠根尖周组织免疫组织化学染色结果，黑色箭头所示为MITF阳性细胞。阳性细胞胞核染色呈棕黄色颗粒状。正常对照组（0W）根尖周组织中有少量MITF阳性表达。术后1周到4周，小鼠根尖周组织中可见MITF阳性表达，并且有递增趋势。MITF阳性细胞所呈形态主要为圆形、卵圆形及梭形。多位于中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞、破骨细胞的胞核内。术后1周，根尖周炎性浸润区可见少量MITF阳性细胞；术后2周，MITF阳性细胞数量增加；术后3周，MITF阳性细胞数量仍然有所增加；术后4周表达量持续增加。术后0周即正常对照组，根尖周组织中有少量MITF阳性表达。统计学分析结果如图3所示，为MITF在各时间点的表达量，以平均光密度值的大小表示；“*”表示不同时间点相比差异具有统计学意义，P<0.05。即术后1周到4周，MITF表达量持续增加，术后0、1、2、3、4周间均具有统计学差异（P<0.05）
图 3MITF 在各时间点小鼠根尖周组织阳性染色 OD 值图中相同符号（*）间表示任意两时间点相比差异具有统计学意义，P<0.05。组织化学染色TRAP染色结果如图4所示，术后1周，根尖周牙槽骨周围可见少量T的破骨细胞，胞浆呈酱红色，细胞核呈蓝色；术后2周，根尖周牙槽量的TRAP染色阳性细胞；术后3周，破骨细胞数量仍增加；术后4周所减少。术后0周即正常对照组，可见个别破骨细胞。统计学分析结，为各时间点的TRAP阳性染色细胞个数；图A表示，术后0周即正常对3、4周间具有统计学差异（P<0.05）；图B表示，术后2、3周间无统>0.05），与1、4周间有统计学差异（P<0.05）。相关性分析结果如F阳性染色OD值和TRAP阳性细胞计数值之间存在中度相关性（r = .05）
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781.341
【图文】：
单因素方差分析进行各时间点比较，P<0.05为差异具有统计学意义。Pearson相关分析评价MITF阳性细胞OD值及TRAP阳性破骨细胞数间的相关性，P<0.01具有统计学意义。结果1.HE染色100 倍镜下小鼠根尖周组织的 HE 染色结果如图 1 所示，术后 1 周，根尖组织区域出现浆液性渗出，炎性浸润范围较小，可见少量中性粒细胞浸润；术后 2 周，根尖区炎性浸润范围增大，可见大量中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞，牙槽骨和牙骨质吸收；术后 3 周，根尖周炎症反应进一步加重，淋巴细胞逐渐增多，牙槽骨吸收加剧。术后 4 周，根尖周炎症浸润减少，多以淋巴细胞、巨噬细胞等散分布，牙槽骨吸收明显。正常对照组（0 周）根尖周偶有炎性细胞浸润，牙槽骨未见异常。
2.免疫组织化学染色MITF免疫组化染色结果如图2所示，为400倍镜下各时间点小鼠根尖周组织免疫组织化学染色结果，黑色箭头所示为MITF阳性细胞。阳性细胞胞核染色呈棕黄色颗粒状。正常对照组（0W）根尖周组织中有少量MITF阳性表达。术后1周到4周，小鼠根尖周组织中可见MITF阳性表达，并且有递增趋势。MITF阳性细胞所呈形态主要为圆形、卵圆形及梭形。多位于中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞、破骨细胞的胞核内。术后1周，根尖周炎性浸润区可见少量MITF阳性细胞；术后2周，MITF阳性细胞数量增加；术后3周，MITF阳性细胞数量仍然有所增加；术后4周表达量持续增加。术后0周即正常对照组，根尖周组织中有少量MITF阳性表达。统计学分析结果如图3所示，为MITF在各时间点的表达量，以平均光密度值的大小表示；“*”表示不同时间点相比差异具有统计学意义，P<0.05。即术后1周到4周，MITF表达量持续增加，术后0、1、2、3、4周间均具有统计学差异（P<0.05）
图 3MITF 在各时间点小鼠根尖周组织阳性染色 OD 值图中相同符号（*）间表示任意两时间点相比差异具有统计学意义，P<0.05。组织化学染色TRAP染色结果如图4所示，术后1周，根尖周牙槽骨周围可见少量T的破骨细胞，胞浆呈酱红色，细胞核呈蓝色；术后2周，根尖周牙槽量的TRAP染色阳性细胞；术后3周，破骨细胞数量仍增加；术后4周所减少。术后0周即正常对照组，可见个别破骨细胞。统计学分析结，为各时间点的TRAP阳性染色细胞个数；图A表示，术后0周即正常对3、4周间具有统计学差异（P<0.05）；图B表示，术后2、3周间无统>0.05），与1、4周间有统计学差异（P<0.05）。相关性分析结果如F阳性染色OD值和TRAP阳性细胞计数值之间存在中度相关性（r = .05）
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 许志亮;;非手术根管再治疗-根尖手术联合治疗难治性根尖周炎[J];首都医科大学学报;2015年03期
2 高学军;董艳梅;;根管治疗技术指南[J];中华口腔医学杂志;2014年05期
3 宋登贤;陈新梅;郑黎薇;;难治性根尖周炎的病因探讨与治疗新理念[J];国际口腔医学杂志;2013年03期
4 ;Incidence of C-shaped root canal systems in mandibular second molars in the native Chinese population by analysis of clinical methods[J];International Journal of Oral Science;2012年03期
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6 朱晓芳;忻平;侯婕;;52例大面积根尖病灶非手术治疗的效果分析[J];中国现代医生;2008年33期
7 徐琼,凌均h
本文编号：2801560
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2801560.html
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