MB-PDT对牙本质小管内粪肠球菌生物膜影响的实验研究

发布时间：2020-08-25 02:15

【摘要】：目的本研究通过在离体牙上制备粪肠球菌生物膜感染牙本质小管的体外模型,经过常规根管冲洗药及亚甲基蓝介导的光动力治疗(MB-PDT)进行灭菌处理,应用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)及平板菌落计数法来评估MB-PDT对牙本质小管内粪肠球菌细菌生物膜的灭菌作用,为临床上治疗牙髓及根尖周病提供新的解决方案。方法将粪肠球菌悬液接种在离体牙牙本质块、经器械预备后的单根管离体牙的牙本质小管内,37℃恒温培养箱中培养。在离体牙牙本质块上建立1d和3w培养的粪肠球菌感染的牙本质小管模型,应用5%NaOCl、2%CHX、MB-PDT进行灭菌处理,每组处理时间分为3min、12min、30min;MB-PDT联合5%NaOCl及MB-PDT联合2%CHX处理12min,随后通过细菌活性荧光染料对灭菌处理后的粪肠球菌感染的牙本质小管模型进行染色,应用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)即刻进行观察扫描,通过Imaris软件进行三维重建以后的图像来计算不同处理方法的粪肠球菌生物膜中的死菌比例,进而评价MB-PDT的杀菌效果。经预备的单根管离体牙在37℃下培养3w后,应用5%NaOCl、2%CHX、MB-PDT、无菌生理盐水处理12min,采集各组样本处理前后的根管壁表面和不同深度(100μm、200μm、300μm)的牙本质碎屑进行菌落培养和计数,计算各组的细菌清除率。结果1.成功建立粪肠球菌感染的牙本质小管模型,在CLSM下观察可见细菌呈链状排列,粪肠球菌成功定植。2.经过三维重建后的牙本质小管内的粪肠球菌生物膜图片显示,5%NaOCl、2%CHX、MB-PDT三种消毒方法都可以有效地杀灭粪肠球菌生物膜中的大部分细菌;但是MB-PDT、2%CHX的灭菌效果不如5%NaOCl(P0.05);延长作用时间,粪肠球菌生物膜的死菌比例增加(P0.05);成熟的粪肠球菌生物膜与年轻的细菌生物膜相比,对灭菌方法的抵抗性强,难被清除(P0.05)。3.经过三维重建后的粪肠球菌感染牙本质小管的生物膜图片显示,MB-PDT联合5%NaOCl杀灭粪肠球菌生物膜内的细菌最多,效果优于单独应用5%NaOCl、2%CHX、MB-PDT和MB-PDT联合2%CHX组(P0.05)。4.5%NaOCl、2%CHX、MB-PDT组在不同根管壁深度处的细菌减少率均显著高于生理盐水组(P0.05),其中5%NaOCl组根管壁表面、牙本质小管内100μm和200μm深度处的细菌减少率最佳,优于2%CHX、MB-PDT(P0.05);MB-PDT组在各个牙本质小管深处的细菌清除率无明显差异(P0.05)。结论MB-PDT对体外的粪肠球菌生物膜的灭菌效果良好,其能够成为一种新的辅助手段来控制在牙髓和根尖周疾病中根管内粪肠球菌的感染,提高根管治疗的成功率。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R781.05
【图文】：

培养基

TSA培养基上粪肠球菌的培养

牙本质,扫描电镜图,样本,观察结果

牙本质样本扫描电镜图

牙本质小管,粪肠球菌,生物膜,根管治疗

经处理的1d感染牙本质小管内的粪肠球菌生物膜5讨论

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