唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞系CSCs亚群的筛选鉴定

发布时间：2020-08-28 00:12

【摘要】：目的运用Q-PCR技术检测以ABCG2为标记物流式细胞仪分选前后ACC-M细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)与肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)目关标记物表达情况,初步筛选唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞系肿瘤干细胞亚群,并结合EMT与CSCs学说讨论其意义。方法(1)10ng/ml TGF-β1诱导培养ACC-M细胞72h,Q-PCR监测ACC-M细胞EMT相关标记物E-cadherin.N-cadherin.Vimentin. MMP-2及CSCs相关标记物Bmi-1、Oct-4、CD44、CD24表达的动态变化。(2)流式细胞术检测TGF-p1对ACC-M细胞中ABCG2+细胞比例的调节变化。(3)以ABCG2为标记物,应用流式细胞术对TGF-β1诱导前后ACC-M细胞进行分选,实验共分为6组,即A1:TGF-β1诱导-、B1:TGF-β1诱导+、A2:TGF-β1诱导一ABCG2+、B2:TGF-β1诱导+ABCG2+、A3:TGF-β1诱导-ABCG2-、B3:TGF-β1诱导+ABCG2-,Q-PCR检测6组细胞EMT及CSCs相关标记物的表达情况。结果(1)EMT相关标记物：上皮表型标记物E-cadherin随诱导时间延长表达逐渐减弱,间质表型标记物N-cadherin与Vimentin.EMT辅助因子MMP-2随诱导时间延长表达逐渐增强；CSCs相关标记物：转录因子Oct-4、粘附分子CD24随诱导时间延长表达逐渐减弱,原癌基因Bmi-1粘附CD44随诱导时间延长表达逐渐增强；EMT的发生与CSCs相关标记物表达密切相关。(2)经TGF-β1诱导后,ABCG2+细胞比例由3.06%增加至6.66%。(3)诱导前后未分选组、ABCG2+组及ABCG2-组各指标表达情况：①诱导前后,上皮表型标记物E-cadherin均在ABCG2-组表达最高,未分选组表达稍低,ABCG2+组表达最低；②诱导前后,间质表型标记物N-cadherin.EMT辅助因子MMP-2、原癌基因Bmi-1及转录因子Oct-4均在ABCG2-组表达最低,未分选组表达稍高,ABCG2+组表达最高；③粘附分子CD44诱导前在各组表达无明显差异,而诱导后则表现为ABCG2+组最高,ABCG2-组与未分选组表达无明显差异；④诱导前后,间质表型标记物Vimentin与粘附分子CD24在三组的表达均无明显差异。未分选组.ABCG2+组及ABCG2-组诱导前后均表现为：①TGF-β1诱导组较未诱导组低表达E-cadherin.Oct-4.CD24;②TGF-β1诱导组较未诱导组高表达N-cadherin.Vimentin.MMP-2、Bmi-1及CD44。结论(1)TGF-p1可诱导ACC-M细胞发生EMT;EMT发生同时,伴随有ACC-M细胞中SPCs亚群表型表达增强,且SPCs较非SPCs更易发生EMT改变。(2)Bmi-1、Oct-4、CD44与CD24参与ACC-M细胞中CSCs亚群比例的调节,且Bmi-1可能是ACC-M细胞中CSCs特殊标记物之一。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.87

【参考文献】