rhBMP-2体外对不同类型山羊髁状突囊内骨折的髁突骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究

发布时间：2020-09-11 14:28

　　 目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)体外对山羊不同类型髁状突囊内骨折后的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响,为后期临床上髁囊内骨折治疗提供参考依据。方法:16只健康山羊双侧关节随机分为4组,8只山羊为左侧A型髁突囊内骨折组(A组)+右侧B型髁突囊内骨折组(B组),另外8只为左侧C型髁突囊内骨折组(C组)+右侧对照组(D组),术后1月、2月、3月、6月分别在各时间点全麻处死4只,分离、提取第3代骨髓间充质干细胞进行rhBMP-2诱导,测定第1~7天的增殖状况(MTT法),测定第7天、10天的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及骨钙素(osteocalcin,OC)含量,培养1周后ALP染色。结果:与非诱导组比较,A、B、C、D组BMSCs使用rhBMP-2诱导剂后,同时间同骨折类型均出现的ALP活性及OC含量明显升高,差异有统计学意义(P0.05);术后1、2、3、6月,B组诱导后ALP活性及OC含量较诱导后A组、C组及D组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);术后1、2、3、6月,A组、C组及D组ALP活性及OC含量对比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:体外分离培养的山羊髁突BMSCs,在诱导剂rhBMP-2的作用下BMSCs表现出明显的成骨活性;在诱导剂rhBMP-2的作用下,B型髁突囊内骨折后的髁突BMSCs在术后1、2、3及6月成骨活性明显高于A型、C型髁突囊内骨折组及对照组。
【学位单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R782.4
【部分图文】：

新疆医科大学硕士学位论文2 研究内容及研究方法2.1 动物模型的制备实验前山羊颗粒饲料喂养 1 周，术前 24 小时禁食水，麻醉前称重，使的氯胺酮－速眠新肌肉按 1.5 ml/ kg 行腹腔注射麻醉。所有山羊关节区手术实验员完成。麻醉生效后，山羊仰卧位固定于实验台上。双侧耳前区备皮铺无菌巾，在颧弓下 0.5 cm 设计 4.0 cm 的平行切口，逐层切开至肌层表面离至髁状突颈部，不分离关节囊附着得情况下切开关节囊小口，暴露部分后用小骨刀敲击，分别形成 A 组、B 组、C 组形成 A 型、B 型、C 型髁突（图 1），D 组仅切开皮肤及皮下组织，显露并打开关节囊上、下腔。造模血，大量生理盐水冲洗术区，分层缝合创面，留置橡皮片，术毕肌注庆大霉素术区加压包扎，术后即刻 CT 等影像学检查明确手术效果。实验山羊麻醉回圈养，术后 48 小时拆除术区加压包扎装置及引流片，术后 7 天拆除术区后先用颗粒软饲料喂养，2 周后改用正常颗粒饲料喂养。A B C

1 术后山羊的情况术后所有山羊术区切口愈合良好，未发生感染情况，16 只山羊均活到术月，16 只山羊均进入实验研究。2 BMSCs 生长形态变化倒置显微镜下，山羊的 BMSCs 原代接种后，呈现大小不一的单个圆形细量的悬浮红细胞向混杂与培养液中。培养 24 小时可见少量细胞出现贴壁。培小时，悬浮细胞明显减少，大部分细胞沉积在瓶底，具有强折光性，多数呈壁生长分散于大量的杂细胞中，贴壁细胞出现伸展变形的现象，伸出伪足，角形。随着换液，贴壁细胞逐渐增多，7-10d 后可见明显细胞集落，呈旋涡状传代后，细胞得以纯化，细胞形态呈现三角形、梭型及少量的多角形细胞，规则。传至第 3 代时，细胞呈长梭型，形态一致，贴壁及增长速度逐渐加快后 4h 小时即可贴壁，生长密集，分布均匀，整体呈漩涡状或放射状排列，细细胞核清晰可见。使用 rhBMP-2 诱导剂后 BMSCs 的生长速度明显减慢，体积形态可多样，梭形或多角形，细胞胞质内可见散在发布的颗粒状物质及空泡（cab c d

a b c d图 3 对照组（D 组）第三代骨髓间充质干细胞表面标记物检测结果及诱导后 ALP 染色结果为 CD29 染色染色结果，胞浆呈黄褐色；图 b 为 CD44 染色染色结果，胞浆呈黄褐色；图 c 为染色染色结果，胞浆未着色；图 d 为 ALP 染色结果，细胞呈现蓝紫色。)（×200 倍）Figure 3 The detection results of surface markers of third-generation bone marrow mesencstem cells and results ofALP staining after induction in control group (group D) (×2004 MTT 比色法检测细胞的增殖并绘制生长曲线通过第 P 代 BMSCs 的 MTT 检测并绘制生长曲线（如图 4）发现，此次实验的细胞增殖能力强，第 2～3d 为潜伏期，在第 2～3d 基本进入生长对数期，第右到达生长峰值，之后进入平台期，生长速度趋向于稳定。图 4 各组第三代骨髓间充质干细胞的生长曲线

【参考文献】

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1 贺洋;张益;安金刚;;口内入路内窥镜辅助下治疗髁颈下骨折[J];中华创伤杂志;2015年02期

2 张连方;康辉;邓廉夫;杨惠林;;促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的血管内皮生长因子[J];中国组织工程研究;2014年41期

3 黄国伟;郑吉驷;张善勇;杨驰;;曲面体层X线、CT和MRI在髁突骨折诊断中的应用比较[J];中华口腔医学杂志;2014年07期

4 徐斌;周亮;王英明;钱三祥;;同种异体脱钙骨与骨髓间充质干细胞关节腔内共培养:与同腔软骨性状的对比[J];中国组织工程研究;2014年08期

5 蔡怡华;陆川;何冬梅;杨驰;;导致颞下颌关节强直的成人髁突骨折类型分析[J];中国口腔颌面外科杂志;2014年01期

6 谭方正;刘新;朴成哲;;骨髓间充质细胞的研究进展[J];沈阳医学院学报;2013年04期

7 姚政铎;何冬梅;勾洪良;;下颌骨髁突骨折的分类及治疗进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2012年06期

8 郑有华;苏凯;匡世军;李鸿;张志光;;人髁突骨髓间充质干细胞体内成骨的实验研究[J];中华口腔医学杂志;2012年01期

9 詹兴旺;姜艳;王文良;;SPIO标记骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养的研究[J];中国矫形外科杂志;2011年09期

10 杨驰;何冬梅;陈敏洁;姜滨;王保利;张晓虎;邱亚汀;张善勇;蔡协艺;;髁突囊内骨折的临床特点和分类研究[J];中国口腔颌面外科杂志;2010年03期

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1 娄超举;BMP-2和TGF-β1双基因转染兔骨髓基质细胞修复软骨缺损的研究[D];郑州大学;2012年

本文编号：2816791