阿司匹林联合维生素D3诱导人口腔鳞癌细胞凋亡的前期研究

发布时间：2020-09-17 07:36

　　目的:本实验旨在初步探讨阿司匹林联合维生素D3对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡能力的潜在作用,为治疗口腔癌提供新的策略和研究方向。方法:本实验分别采用不同浓度的阿司匹林,维生素D3单独或者联合作用于人类口腔鳞状细胞癌细胞株(CAL-27和SCC-15)。采用CCK-8检测法检测人口腔鳞癌细胞的增殖能力在不同浓度的药物单独或者联合作用不同时间后受抑制的情况,流式细胞技术(Annexin VFITC/PI双染法)检测药物单独或者联合作用对人口腔鳞癌细胞的凋亡能力的影响。采用Western blot法分析药物作用对抗凋亡蛋白Bcl-2在人口腔鳞癌细胞内的表达水平的影响和对凋亡通道蛋白Erk1/2在人口腔鳞癌细胞内的磷酸化水平的影响。结果:不同浓度的阿司匹林与维生素D3联合作用,较空白对照组或单药组,均可以显著地降低CAL-27和SCC-15细胞的增殖率,而且能够诱导更高的细胞凋亡率。同样显著地,阿司匹林和维生素D3联合作用能够抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和下调Erk1/2蛋白的磷酸化水平。结论:本实验初步证实了治疗浓度范围内的阿司匹林和维生素D3联用后具有协同或共性地杀伤两种人类口腔鳞癌细胞株的生物活性。阿司匹林和维生素D3联用后之所以能激发出强烈的抗口腔鳞癌细胞增殖和促进其凋亡的能力,与呈下调状态的Bcl-2蛋白水平和Erk1/2的非磷酸化状态密切相关。因此本实验提示阿司匹林和维生素D3联用可能成为一种有效的杀伤口腔鳞癌细胞的治疗方式。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.8
【部分图文】：

阿司匹林,维生素D3,鳞癌细胞,人口

图 1 阿司匹林联合维生素 D3 呈时间、剂量依赖性地抑制人口腔鳞癌细胞的增殖Fig. 1 The combination of ASA and vitamin D3 inhibited the proliferation of OSCC cells. (a) CAL-27 cells and (b) SCC-15 cells weretreated with ASA at indicated concentrations alone, and in combination with vitamin D3 for 24h, 48h and 72h, respectively. At eachtime point, the cell proliferation was detected using Cell-Counting Kit-8 assays. Data are presented as the mean ± SE from threeindependent experiments.2.2 检测阿司匹林联合维生素 D3 对人口腔鳞癌细胞作用后的 IC50如表 1 所示，阿司匹林联合维生素 D3 作用于 CAL-27 细胞所产生的 IC50（杀死 50%细胞所需的药物浓度）（0.97±0.06 mM, 0.33±0.02 mM, 0.21±0.01 mM）明显低于阿司匹林单独作用情况下的IC50（1.59±0.06mM,0.68±0.03mM,0.47±0.01mM）（p<0.01）。我们在表 1 中还发现阿司匹林单独作用于 SCC-15 细胞所产生的 IC50（1.28±0.06 mM, 0.82±0.07 mM, 0.41±0.001 mM）也是远远高于阿司匹林与维生素D3 联合作用情况下所产生的 IC50（0.79±0.02 mM, 0.27±0.03 mM, 0.15±0.02 mM）（p<0.01）。

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图 2 阿司匹林联合维生素 D3 诱导人口腔鳞癌细胞凋亡Fig. 2 Aspirin in combination with vitamin D3 induces apoptosis of human OSCC cells. The two cell lines were treated with 1 mMASA alone, 75 nM vitamin D3 alone and ASA/vitamin D3 for 48 h. The cells were harvested to analyze apoptosis using flow cytometry.(a) Annexin V FITC/PI assay of CAL-27 cells. (b) Annexin V-FITC/PI assay of SCC-15 cells. Numbers in the respective area indicatethe percentage of cells. (c) Apoptotic rates of CAL-27 and SCC-15 cells induced by ASA alone, vitamin D3 alone and ASA + vitaminD3. Results are expressed as the mean ± SE from three independent experiments.***p < 0.001, compared to untreated control;#p <0.01,##p < 0.001, compared to corresponding combined treatment.2.2 检测阿司匹林联合维生素 D3 对人口腔鳞癌细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2 的作用我们采用 Western-blot 法观察抗凋亡蛋白 Bcl-2 在经过阿司匹林（1 mM）、维生素 D3（75nM）单独或联合处理 48 小时后的人口腔鳞癌细胞内的表达水平。结果显示，阿司匹林或维生素 D3 单药作用组均可以导致 CAL-27 细胞内的 Bcl-2 表达水平较对照组明显下降。然而，在 SCC-15 细胞内，只有阿司匹林单药作用组显著地抑制了 Bcl-2 表达水平。更重要的结果表明对于这两种口腔鳞癌细胞，维生素

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图 3 阿司匹林和维生素 D3 联合下调 Bcl-2 在人口腔鳞癌细胞内的表达水平irin and vitamin D3 downregulates the level of Bcl-2 in OSCC cells. (a) CAL- vitamin D3 alone and ASA + vitamin D3 for 48 h, respectively. The protein leveith corresponding antibodies. Protein levels were normalized to GAPDH. (b) Dent experiments.**p < 0.01,***p < 0.001, compared to combined treatment;#3 讨论ellapoptosis）是公认的细胞程序性死亡方式之一。的调控常常表现出抗凋亡的性质。因此，研究者常至逆转肿瘤细胞的抗调亡能力或者诱导肿瘤细胞应用前景。同时癌症的发生常常伴随着细胞凋亡相Bcl-2 蛋白作为抗凋亡蛋白家族中重要的一员，参亡的环节[1-3]。因此抗凋亡蛋白 Bcl-2 可作为药物殖的参考指标。

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