三种不同口腔修复体研磨粉尘对小鼠巨噬细胞毒性研究

发布时间：2020-10-12 20:06

　　 目的:长期暴露于口腔修复体研磨粉尘可导致口腔从业人员呼吸系统疾病,如肺纤维化、矽肺等,为明确修复体调磨粉尘对口腔临床医生的影响,将常见粉尘,树脂(Poly methylmethacrylate polymer,PMMA)、维他灵(Vitallium)、瓷粉尘作用于RAW264.7小鼠巨噬细胞,检测其毒性作用相关指标,为口腔从业人员的个人防护提供基础数据。方法:1、模拟临床操作收集三种口腔修复体研磨粉尘及经过研钵精细研磨后粉尘,应用扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)、激光粒度分析仪(Particulate size description analyser,PSDA)、能量分散光谱仪(Energy dispersive X-ray,EDX)对粉尘颗粒的形状、直径、成分进行检测。2、将上述三种精细研磨粉尘配制成300μg/ml作用于RAW264.7巨噬细胞,通过光学显微镜及吖啶橙(Acridine orange,AO)荧光染色观察细胞形态变化,探讨口腔修复体研磨粉尘对RAW264.7小鼠巨噬细胞形态的影响。3、将上述三种精细研磨粉尘配制成50μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、450μg/ml、600μg/ml作用于RAW264.7巨噬细胞,24h、48h后通过检测培养上清液中乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)的含量,6h、12h、24h、48h后检测细胞产生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平,采用析因设计方差分析、单因素方差分析等统计学方法进行数据统计,进一步探讨粉尘对RAW264.7小鼠巨噬细胞产生损伤的可能机制。结果:1、三种粉尘具有不同的形状、粒径及组成成分。PMMA组呈团块状,边缘圆钝不规则,Vitallium组呈片状,边缘形态不规则,瓷组呈立方体状,边缘锐利不规则;粉尘粒径分布范围广泛,精细研磨后,粒径明显变小;PMMA粉尘以C、O为主,Vitallium粉尘以Cr、Co、Mo为主,瓷粉尘以Si、Al、O为主。2、三种粉尘在300μg/ml浓度下,作用于RAW264.7细胞,光学显微镜下见,细胞伪足数目增多,且伪足不同程度伸长,细胞呈现不规则、气球样变状态。AO荧光染色后发现染尘细胞核偏移、细胞伪足伸长。3、三种粉尘分别在50μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、450μg/ml、600μg/ml作用于RAW264.7,LDH活性及ROS荧光强度结果表明,随着时间的延长、浓度增加,LDH、ROS释放量升高,差异具有统计学意义(P0.05);瓷粉尘组LDH、ROS高于Vitallium组和PMMA组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1、三种口腔修复体精细研磨粉尘作用于RAW264.7,随时间延长、浓度升高,细胞产生的LDH、ROS也随之升高,提示粉尘毒性存在一定的时间、剂量依赖性,提示临床医生应尽量减少粉尘接触。2、瓷粉尘较PMMA粉尘和Vitallium粉尘对RAW264.7巨噬细胞的损伤更为严重。3、口腔修复体研磨粉尘作用于RAW264.7细胞,24h、48h两时间点LDH与ROS变化存在一致性,提示粉尘产生毒性的可能机制是粉尘进入细胞后产生脂质过氧化反应,损伤细胞膜等结构,因此应加强临床医生的职业防护,减少粉尘对医生的伤害。
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R783
【部分图文】：

中国医科大学硕士学位论文3 实验结果3.1 三种修复体研磨粉尘 SEM 检测采用 SEM 对精细研磨前后口腔修复体粉尘进行表面形态的检测，结果显示三种口腔修复体研磨粉尘形态差异很大，如图 1、2 所示，PMMA 组 (A、B) 呈团块状，边缘圆钝不规则，且粒径相差较大。Vitallium 组 (C、D) 呈片状，边缘形态不规则。瓷粉尘组 (E、F) 呈立方体状，边缘锐利不规则。精细研磨后除粉尘粒径明显变小外，其余无明显改变。

图 2 口腔修复体尘粒 SEM 观察结果 (1000×)(a：PMMA 粉尘，b：Vitallium 粉尘，c：瓷粉尘)3.2 三种修复体研磨粉尘 PSDA 检测采用 PSDA 对三种口腔修复体材料精细研磨前后粒径进行检测，结果如表 1 所示。可见三种粉尘粒径分布范围广泛，各不相同，精细研磨后小粒径粉尘含量不同程度增加。其中瓷粉尘精细研磨前后粒径小于10μm的粉尘分别占总粉尘的25.53%和42.3%，明显高于其他两组粉尘。表 1 口腔修复体材料精细研磨前后直径分布PMMAPMMA研磨后VitalliumVitallium研磨后瓷瓷研磨后<5μm(%) 4.19 8.23 0.08 1.03 12.79 21.05

图 3 口腔修复体尘粒组成成分(A：PMMA 组，B：Vitallium 组，C：瓷组)3.4 三种修复体研磨粉尘作用于 RAW264.7 相差倒置显微镜结果采用相差倒置显微镜观察三种口腔修复体研磨粉尘在 300μg/ml 浓度下，作用于RAW264.7，24h、48h 细胞形态的变化，如图 4，阴性对照组细胞呈规则圆形，而三种口腔修复体研磨粉尘使细胞形态发生变化，培养 24h、48h 后，粉尘吸附于细胞表面或进入细胞内部，细胞呈现不规则形态，伪足增多，且伪足不同程度伸长，部分细胞甚至出现气球样变状态。
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本文编号：2838213