排龈线浸提液对体外培养人牙龈成纤维细胞的毒性研究

发布时间：2020-10-19 06:32

　　 目的： 本实验通过研究三种排龈线(肾上腺素排龈线、硫酸铝排龈线、不含药排龈线)的细胞相容性及排龈线在不同浸提时间(5min、10min、15min、30min)下对体外培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts, HGFs)的毒性大小,为临床选择合适的排龈线和排龈时间提供理论依据。 方法： 实验1、采用组织块培养法培养HGFs,并进行形态学和免疫学鉴定。对HGFs进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。 实验2、三种排龈线(含肾上腺素排龈线、含硫酸铝排龈线、不含药排龈线)分别浸透在含10%胎牛血清的DMEM中24h。浸提液再按1：1和1：4浓度稀释,分别作用于体外培养的HGFs,阴性对照组为含10%胎牛血清的DMEM,噻唑兰(Thi-azolyl blue, MTT)比色测定细胞增殖活性,透射电镜观察细胞超微结构。 实验3、将上述每种排龈线各4段,分别浸透在含10%胎牛血清的DMEM中,5min、10min、15min、30min后取出排龈线。采用MTT比色法观察不同时间的浸提液对HGFs的活性影响；Annexin/PI双染法检测不同时间的浸提液对HGFs凋亡的影响。 结果： 1、HGFs原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)鉴定抗波形蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。HGFs冻存与复苏成功,细胞经两次传代后生物学性状与原代相似。 2、MTT结果显示：每组排龈线浸提液经1：1稀释后细胞活性低于正常(p0.05),1：4稀释后只有肾上腺素排龈线细胞活性较正常组低(p0.05)；三组排龈线浸提液毒性大小依次为：肾上腺素排龈线硫酸铝排龈线不含药排龈线(p0.05)。透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope, TEM)观察,肾上腺素组部分细胞出现凋亡,其他两组仅观察到细胞器的损伤。 3、MTT结果显示：三种排龈线在不同浸提时间下均产生毒性损伤作用,每组排龈线浸提5min与1Omin的细胞毒性作用相同(p0.05)；肾上腺素排龈线浸提5min与15min、30min比较差异有统计学意义,硫酸铝排龈线浸提5min与30min比较差异有统计学意义(p0.05)；不含药排龈线在各个浸提时间段毒性损伤作用相同(p0.05)。流式细胞仪(Flow cytometer, FCM)观察,不同浸提时间下的排龈线可诱导HGFs凋亡的发生,随着浸提时间延长(15min、30min), HGFs的早期凋亡率逐渐增加,显著高于正常组(p0.05)。 结论： 1、采用组织块培养法培养原代HGFs及冻存与复苏方法可行,为进一步从细胞学、分子生物学水平研究口腔材料的细胞相容性奠定了基础。 2、各组排龈线浸提液对HGFs都有一定的毒性,肾上腺素排龈线毒性最大,硫酸铝排龈线毒性次之,不含药排龈线也出现了一定的细胞毒性。 3、不同浸提时间下的排龈线对HGFs的活性及凋亡有不同程度的影响,随着浸提时间的延长,细胞活性逐渐降低,凋亡率增大。 4、使用肾上腺素排龈线排龈时不超过l0min为宜,硫酸铝排龈线排龈不超过15min。
【学位单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R783.3
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
引言
    参考文献
第一部分 正常人牙龈成纤维细胞的分离培养、鉴定、冻存及复苏
    材料和方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 三种排龈线对体外培养人牙龈成纤维细胞的毒性比较
    材料和方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
第三部分 不同浸提时间下的排龈线对牙龈成纤维细胞的毒性研究
    材料和方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
全文总结
附图
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
文献综述
    参考文献

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 张津京;刘玉华;吕培军;赵一姣;;三维模型分析法评价不同排龈时间下的龈沟宽度[J];北京大学学报(医学版);2011年01期

2 冯云枝;曾晓华;;不同排龈药物的排龈效果观察[J];华西口腔医学杂志;2011年01期

3 张晓明;惠敏;刘健;;排龈时间与药物对牙龈成纤维细胞的毒性比较研究[J];实用口腔医学杂志;2011年02期

4 樊聪,冯海兰,何建新;应用排龈技术减少临床牙龈损伤[J];现代口腔医学杂志;2001年01期

本文编号：2846851