压应力对SD大鼠髁突软骨下骨成骨细胞增殖和凋亡影响的体外研究

发布时间：2020-10-27 08:11

　　 [目的]通过体外原代培养SD大鼠髁突软骨下骨成骨细胞,建立细胞模型。研究体外髁突软骨下骨成骨细胞加载机械压应力后,不同时点成骨细胞的增殖和凋亡的变化,对压应力刺激导致的成骨细胞生物学和生物力学特性改变进行初步探讨,为颞下颌关节改建的研究提供实验依据。 [方法]采用改良贴壁组织块反复消化法培养细胞。通过倒置显微镜和HE染色观察其细胞形态；用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和钙化结节茜素红S (alizarin red S,ARS)染色方法进行细胞鉴定；噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测其生物学特性。运用Forcel四点弯曲细胞力学加载仪对体外培养的软骨下骨成骨细胞实验组施加压应力(强度2000μstrain频率0.5Hz)1h,分别于加力后Oh、6h、12h、18h、24h收集细胞和进行细胞流式检测各时间点细胞的增殖和凋亡的数据。对照组除不加力之外,其它培养条件和检测方法与实验组相同。 [结果]采用改良贴壁组织块反复消化法成功培养出原代成骨细胞,其形态学、生长特性和生物学特性符合成骨细胞特性；碱性磷酸酶染色和钙化结节茜素红S染色均呈阳性,证实所培养的细胞是成骨细胞。压应力1h后实验组的增殖指数在加力结束时Oh较对照组增高(P0.05),差异有统计学意义,但加力后6h检测到指数逐渐恢复,并在6h-24h内表现出与对照组相似的水平和变化趋势,差异无显著性(P0.05)；实验组的S期细胞百分比加力结束后0h-24h都较对照组增高(P0.05),差异有统计学意义,但实验组的S期细胞百分比与增殖指数两者之间没有简单的线性关系；实验组的凋亡指数加力结束时0h较对照组降低(P0.05),差异有统计学意义,但加力后6h检测到实验组的增殖指数逐渐恢复,并在6h-24h内表现出与对照组相似的水平和变化趋势,差异无显著性(P0.05)。 [结论]本实验采用改良贴壁组织块反复消化法成功体外培养SD大鼠髁突软骨下骨成骨细胞有限细胞系。适当的压应力后早期能提高成骨细胞的增殖能力和抑制凋亡,但这种影响会随着时间的延长而减弱,成骨细胞具有平衡生长过程中增殖和凋亡水平的内在调控能力。即一定的压应力能促进成骨细胞的生长,促进新骨的形成和软骨下骨的改建。
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R780.2
【文章目录】：
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前言
第一部分 SD大鼠髁突软骨下骨成骨细胞的原代培养与鉴定
    1 材料
    2 方法
    3 结果
    4 讨论
    5 结论
第二部分 压应力对成骨细胞增殖与凋亡的影响
    1 材料
    2 方法
    3 实验结果
    4 讨论
    5 结论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的文章
致谢

【参考文献】

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本文编号：2858286