牙周脓肿普雷沃菌分离鉴定及耐药性研究
发布时间：2020-11-02 10:14
目的： 对于牙周炎伴牙周脓肿患者普雷沃菌属的普遍性研究,比较API20a生化鉴定法和16S rRNA分子生物学方法鉴定普雷沃菌属的准确率,对分离鉴定的普雷沃菌进行抗生素敏感性分析及耐药基因检测,为临床治疗牙周厌氧菌感染合理选用抗生素提供理论依据。 方法： 1.2011年8月-2012年8月,于复旦大学附属华山医院口腔科选取41例牙周脓肿患者(男21例,女20例,年龄：36±10岁)为研究对象。采用椅旁牙周脓肿取样,接种于厌氧基础平板和筛选平板,应用简易厌氧袋培养法,经两至三次耐氧实验,培养的牙周脓肿专性厌氧菌以API20a生化鉴定法和16S rRNA分子生物学技术进行鉴定,进一步筛选普雷沃菌属。 2.根据美国临床实验室标准化协会(Clinical Laboratory Standards Institution)推荐的琼脂稀释法参考方案(M11-S220)测定牙周厌氧菌及普雷沃菌属分别对甲硝唑、头孢拉定、头孢克肟、阿莫西林、克林霉素、罗红霉素、多西环素、亚胺培南,8种临床常用抗菌药物的敏感性。 3.根据药敏实验结果获得耐药菌株,采用PCR法,分别检测耐药菌株nim、cfxA、 ermF、tetQ时药基因,研究其普遍性。 结果： 1.简易厌氧袋培养法分离培养的细菌具有良好的专性厌氧特性及传代增殖能力。经分离鉴定,牙周普雷沃菌属的分离培养率为71.1%。以16S rRNA序列测定技术鉴定为标准,API20a生化技术鉴定牙周普雷沃菌属准确率为83.3%,普雷沃菌种鉴定准确率为38.1%。 2.药敏试验结果显示：牙周脓肿普雷沃菌对亚胺培南的耐药率为0%,对多西环素和甲硝唑耐药率分别为4.8%和9.5%,对克林霉素、阿莫西林、罗红霉素及头孢克肟的耐药率分别为38.1%、30.9%、26.2%和9.5%。 3.普雷沃耐药菌株的耐药基因检测结果显示：13株阿莫西林耐药菌株中,ofxA检出率为61.5%,19株克林霉素和／或罗红霉素耐药菌株中,ermF检出率为68.4%,4株甲硝唑耐药普雷沃菌中,检出2株nim基因阳性,均为nimBo4株多西环素耐药菌株中,检出2株tetQ阳性。 结论： 1.普雷沃菌属是牙周脓肿厌氧菌群中的优势菌之一；API20a生化法鉴定普雷沃细菌种属时存在一定误差。 2.牙周脓肿来源的普雷沃菌对抗菌药物的耐药性不同,对口腔临床常用药物,克林霉素及罗红霉素呈现的耐药性较高；对青霉素类和甲硝唑的耐药性的增长也需要引起注意。因此,在使用抗生素治疗牙周脓肿之前,建议进行厌氧菌抗生素敏感性监测,以减少耐药菌的产生。 3.不同耐药基因在普雷沃耐药菌中的检出率存在差异。本实验中,cfxA、ermF耐药基因在普雷沃耐药菌中的检出率较高,分别为61.5%,68.4%；而由于多西环素及甲硝唑耐药菌株检出较少,对于tetQ及nim的耐药基因的普遍性还需进一步研究。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R781.4
【部分图文】：
仪器设各?：微量移液器（Eppendorf公司，德国），SmartV i ew凝胶成像及分析系统（复H科技，中国），高速冷冻离心机Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德国），显微镜(NIKON E200，中国），核酸定量仪Nanodrop 2000c (Thermo公司，美国），9700PCR仪（ABI，美国），电泳槽（TAITEC，円本）。、实验方法标本米集与接种嘱患者漱口后，无菌棉球隔湿，2%碘伏消毒牙周脓肿术区，用无菌刀片明显的最低位处切开，lOul—次性接种环沾取脓血，立即接种于预还原氧血平板和厌氧基础血平板，为便于在混合培养物中发现厌氧菌，标本种平板，置于厌氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)专性培育3-5天。
仪器设各?：微量移液器（Eppendorf公司，德国），SmartV i ew凝胶成像及分析系统（复H科技，中国），高速冷冻离心机Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德国），显微镜(NIKON E200，中国），核酸定量仪Nanodrop 2000c (Thermo公司，美国），9700PCR仪（ABI，美国），电泳槽（TAITEC，円本）。、实验方法标本米集与接种嘱患者漱口后，无菌棉球隔湿，2%碘伏消毒牙周脓肿术区，用无菌刀片明显的最低位处切开，lOul—次性接种环沾取脓血，立即接种于预还原氧血平板和厌氧基础血平板，为便于在混合培养物中发现厌氧菌，标本种平板，置于厌氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)专性培育3-5天。
光滑、边缘整齐、不溶血的菌落，伴有培养基恶臭，部分菌株3-7天后可见变黑色。详见图3、图4。■ _图3: Prevotellataxon 302 (不产黑色素普雷沃） 图4:产黑普雷沃14
【参考文献】
本文编号：2866914
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R781.4
【部分图文】：
仪器设各?：微量移液器（Eppendorf公司，德国），SmartV i ew凝胶成像及分析系统（复H科技，中国），高速冷冻离心机Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德国），显微镜(NIKON E200，中国），核酸定量仪Nanodrop 2000c (Thermo公司，美国），9700PCR仪（ABI，美国），电泳槽（TAITEC，円本）。、实验方法标本米集与接种嘱患者漱口后，无菌棉球隔湿，2%碘伏消毒牙周脓肿术区，用无菌刀片明显的最低位处切开，lOul—次性接种环沾取脓血，立即接种于预还原氧血平板和厌氧基础血平板，为便于在混合培养物中发现厌氧菌，标本种平板，置于厌氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)专性培育3-5天。
仪器设各?：微量移液器（Eppendorf公司，德国），SmartV i ew凝胶成像及分析系统（复H科技，中国），高速冷冻离心机Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德国），显微镜(NIKON E200，中国），核酸定量仪Nanodrop 2000c (Thermo公司，美国），9700PCR仪（ABI，美国），电泳槽（TAITEC，円本）。、实验方法标本米集与接种嘱患者漱口后，无菌棉球隔湿，2%碘伏消毒牙周脓肿术区，用无菌刀片明显的最低位处切开，lOul—次性接种环沾取脓血，立即接种于预还原氧血平板和厌氧基础血平板，为便于在混合培养物中发现厌氧菌，标本种平板，置于厌氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)专性培育3-5天。
光滑、边缘整齐、不溶血的菌落，伴有培养基恶臭，部分菌株3-7天后可见变黑色。详见图3、图4。■ _图3: Prevotellataxon 302 (不产黑色素普雷沃） 图4:产黑普雷沃14
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 凌均棨;杨芳;滕飞;;新一代高通量技术在龋病相关的口腔菌群宏基因组学研究中的应用[J];中华口腔医学研究杂志(电子版);2011年04期
本文编号：2866914
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2866914.html
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