辛伐他汀对牙周炎大鼠牙周组织中TGF-β、IL-1、TNF-α表达的影响

发布时间：2020-11-06 06:46

　　 目的通过使用正畸结扎钢丝结扎SD大鼠右侧上颌第一磨牙配合高糖饮食的方法建立牙周炎模型,对牙周炎模型动物给予辛伐他汀药物治疗,药物治疗后免疫组化检测牙周组织中转换生长因子-β、白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-α的表达,进而探讨辛伐他汀对牙周炎炎症反应以及骨改建的影响,为临床上牙周炎患者的治疗提供实验基础。方法60只2个月龄健康SD雄性大鼠,体重达(220±20)g,清洁级,普通饲料喂养,动物自由饮水和摄食。适应性饲养后,第1章采用简单随机化分组法将30只动物平均分为三组,每组10只。实验组M1组:结扎牙齿,高糖饮食。阴性对照组M2组:不结扎牙齿,高糖饮食。空白对照组M3组:不结扎牙齿,正常饮食;实验周期为8周。在整个实验周期中每周监测大鼠体重的变化,于第8周末检测大鼠右侧上颌第一磨牙的牙周袋深度、牙龈指数、牙松动度、牙槽骨吸收量四项牙周炎临床常见检测指标。8周末动物处死后采集牙及牙周组织标本制成切片进行组织病理学观察。第2章将30只SD大鼠按照第1章的方法建立牙周炎模型后随机分为三组,N1组:辛伐他汀用药组,N2组:生理盐水组,N3组:空白对照组。每组10只,恒温饲养。于8周末处死动物,截取右侧上颌第一磨牙区的牙及牙周组织,免疫组化观察牙周组织中转换生长因子-β,白细胞介素-1,肿瘤坏死因子-α的表达量,用IPP6.0软件对三种因子阳性表达区的平均光密度值进行图像分析,其结果用SPSS21.0软件进行统计学分析。结果1 M2、M3两个对照组大鼠的体重持续增加,而M1实验组大鼠体重先减少后增加,与两对照组相比,体重变化有统计学差异(P0.05)。2 M2、M3两个对照组大鼠牙龈指数,牙松动度,牙槽骨吸收量的指标分值与正常健康大鼠相比未发生改变,而M1实验组大鼠的三项指标均发生改变,并且与M2、M3两个对照组相比,M1实验组大鼠的牙周袋深度加深,差异有统计学意义(P0.05)。3大鼠右侧上颌第一磨牙区牙周组织HE染色结果:M1实验组上皮向结缔组织增生呈网眼状,其周围可见炎症细胞浸润,血管扩张充血,牙周胶原纤维水解,牙槽骨吸收呈现为疏松网状,符合牙周炎病理学诊断标准;而M2、M3两个对照组符合正常牙周的组织学标准。4辛伐他汀治疗后,大鼠右侧上颌第一磨牙区牙周组织免疫组织化学检测结果显示:N1实验组牙周组织中转换生长因子-β的表达量高于N2、N3两对照组,而白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-α的表达量低于两对照组。结论1实验证明通过钢丝结扎配合高糖饮食法,8周可成功建立SD大鼠的牙周炎动物模型。2实验证明了辛伐他汀可以促进牙周组织中转换生长因子-β的表达,同时抑制白细胞介素-1和肿瘤坏死因子-α的表达。
【学位单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R781.42
【部分图文】：

3.5ml/kg 的剂量对 M1组大鼠进行腹腔注射的全身麻醉，大约 5-10 分钟麻醉起效后，将大鼠固定于实验台面的平板上（见图 1），用牙龈分离器剥离大鼠右侧上颌第一磨牙的牙龈组织，目的是通过剥离牙龈的局部刺激造成牙龈组织的炎性水肿，从而便于对牙齿的结扎操作。剥离操作每天进行一次，持续两天，且两天剥离的时间保持一致。第三天采用 0.2mm 正畸结扎钢丝牢固结扎大鼠右侧上颌第一磨牙的牙颈部（见图 2），然后将多余长度的结扎丝减掉，使结扎丝断端压入到龈沟内并使其尽量向牙根方向靠近。每周用上述同样的麻醉方法及操作步骤对牙齿进行重新结扎，保证结扎丝的长期稳固存在，并在 8 周的实验周期中予以 10%的白砂糖水以及白砂糖浸泡的软饲料喂食。（2）M2组：不剥离牙龈，不结扎牙齿，只在实验期间予以 10%的白砂糖水及白砂糖浸泡的软饲料喂食，连续饲养 8 周。（3）M3组：不剥离牙龈，不结扎牙齿，普通饲料喂养，纯水饮用。连续饲养8 周。

3.5ml/kg 的剂量对 M1组大鼠进行腹腔注射的全身麻醉，大约 5-10 分钟麻醉起效后，将大鼠固定于实验台面的平板上（见图 1），用牙龈分离器剥离大鼠右侧上颌第一磨牙的牙龈组织，目的是通过剥离牙龈的局部刺激造成牙龈组织的炎性水肿，从而便于对牙齿的结扎操作。剥离操作每天进行一次，持续两天，且两天剥离的时间保持一致。第三天采用 0.2mm 正畸结扎钢丝牢固结扎大鼠右侧上颌第一磨牙的牙颈部（见图 2），然后将多余长度的结扎丝减掉，使结扎丝断端压入到龈沟内并使其尽量向牙根方向靠近。每周用上述同样的麻醉方法及操作步骤对牙齿进行重新结扎，保证结扎丝的长期稳固存在，并在 8 周的实验周期中予以 10%的白砂糖水以及白砂糖浸泡的软饲料喂食。（2）M2组：不剥离牙龈，不结扎牙齿，只在实验期间予以 10%的白砂糖水及白砂糖浸泡的软饲料喂食，连续饲养 8 周。（3）M3组：不剥离牙龈，不结扎牙齿，普通饲料喂养，纯水饮用。连续饲养8 周。

5）各组大鼠右侧磨牙段标本的采集（1）标本采集：将各组 SD 大鼠麻醉处死后，为了便于截取检测的组织标本，首先用手术剪将大鼠的两侧口角分别剪开，扩大操作视野，分离出大鼠完整的上颌骨骨组织后截取右侧上颌第一磨牙区段作为组织标本（见图 3）。（2）各组大鼠右侧上颌第一磨牙牙槽骨吸收量的测量：按上述标本采集的方法取组织标本，并将附着于右侧上颌第一磨牙区段骨组织上的牙龈以及骨膜剔除干净，测量右侧上颌第一磨牙釉牙骨质界到牙槽嵴顶之间的距离，每颗牙分别选取近中颊侧、颊侧中央、远中颊侧、近中舌侧、舌侧中央、远中舌侧六个位点进行测量，所测数值取平均值作为该牙牙槽骨吸收量的平均分值。6）各组大鼠右侧上颌第一磨牙区段标本的制备（1）标本的固定：将采集好、修剪好的组织标本置于含有 4%溶液浓度、PH值为 7.2-7.4 的多聚甲醛溶液的玻璃容器中固定 24 小时（见图 4），并放在 4℃恒温冰箱内储存。
【参考文献】

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本文编号：2872796