p38MAPK信号通路在低强度脉冲超声波诱导人牙周膜细胞成骨分化中作用探讨
发布时间：2021-01-28 05:54
人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）是牙周组织的主要细胞成分,含有不同分化方向和阶段的异质性细胞群体,有合成胶原,吞噬经酶降解的陈旧胶原纤维,形成牙骨质等作用,对牙周组织起作修复和保护的作用,也是牙周组织再生的细胞学基础。研究表明[1-3]低强度脉冲超声（low intensity pulsed ultrasound ,LIPUS）的刺激可引起细胞膜结构变化,改变K+等离子的通透性、激活第二信使、影响细胞因子的表达,从而引起骨折愈合的链式反应;可以促进局部血流及淋巴的循环,促进生长因子等骨折愈合关键物质如细胞活素等的运输加强,刺激细胞增殖及细胞外基质合成。p38MAPK是MAPK家族的重要成员之一,近年来研究发现p38MAPK在骨的代谢中也发挥着重要的作用。PDLCs与成骨细胞具有一定的相似性,我们推测p38MAPK可能参与了PDLCs的分化调控,同时推测p38MAPK也可能参与了LIPUS诱导的PDLCs成骨分化。因此,本研究在p38MAPK在LIPUS诱导hPDLCs成骨分化的作用机制的探讨具有重要意义...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hPDLCs原代培养细胞爬出（×200）
10) 用 75％、85％、95％酒精 1 次，无水乙醇 2 次进行梯度脱水，每次 1min；二甲苯透明；甘油封片，显微镜下观察染色情况并拍照进行记录。2 结果2.1 体外培养的 hPDLCs 形态学及生化特性表现组织块法进行原代培养 7-10 天，可见细胞从组织块中爬出并以组织块为中心呈放射状排列，形成生长晕（图 1.1）；若组织块培养 20 天仍未见细胞爬出，视为无体外生长能力。原代细胞覆盖率达 60%时进行传代分离，传代后细胞均呈长梭形或星形；胞突细长且像周围呈现出数个突起；胞浆丰富均匀；细胞核为圆形或为椭圆形居中,核内可有 2-3 个核仁；细胞间呈束状、栅栏状或旋涡状排列，当生长密集时可出现复层生长。（图 1.2）
图 1.4 波形丝蛋白染色阳性(×100)Fig1.4 Positive immunohistoclmical staining forVimentin on hPDLCs (x 100)图 1.5 角化蛋白染色阴性(×200)Fig 1.5 Negtive immunohistochmicalstaining for Keratin on hPDLCs(×200)3 讨论组织块培养法是将组织小块平铺在培养瓶的底部，细胞自行从组织边缘游出，从而获得取原代细胞的方法。组织块培养法操作简单，污染几率相对较小，培养出来的细胞同源性较高；但该方法周期较长，同时贴壁率较低。马佳音[33]等发现组织块法成功率为 16.67%， 分析原因可能为：细胞不易贴壁； 细胞包裹于组织中，营养及穿透能力有限，出现代谢不佳；组织块中的纤维成分束缚了细胞的游出； 贴壁时，培养液对组织块的浸润不足使细胞受到损伤；培养液中组织碎片代谢物对细胞的生长产生了影响。口腔属于相对污染的环境，收集实验牙后应立即
【参考文献】：
期刊论文
[1]三种组织块法培养人牙周膜细胞的比较研究[J]. 马佳音,胥春,郝轶,张富强. 组织工程与重建外科杂志. 2010(03)
[2]p38 MAPK信号传导通路及其抑制剂的研究现状[J]. 张频捷,朱立新,耿小平. 安徽医药. 2010(05)
[3]p38MAPK抑制对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响[J]. 李瑞霞,肖喜荣,顾超,徐嬿,李斌. 复旦学报(医学版). 2010(01)
[4]三七总皂甙通过P38MAPK信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞的增殖、分化[J]. 李学东,陈斌,郑创义,刘钊勇,杜世新. 中国伤残医学. 2009(04)
[5]p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展[J]. 王国军,刘亚伟,李玉花,姜勇. 生物技术通讯. 2009(03)
[6]牙周韧带细胞植入量与牙周组织再生量关系的动物实验[J]. 马忠雄,闫福华,钟声. 福建医科大学学报. 2008(05)
[7]骨灵片通过p38 MAPK信号通路影响成骨细胞功能的机制[J]. 黄少慧,张娟,李娟,蔡红兵. 南方医科大学学报. 2008(07)
[8]低强度超声对大鼠牙槽骨改建过程中BMP-2表达的影响[J]. 薛慧,彭惠,杨东红,王宏艳,吴立鹏. 黑龙江医药科学. 2007(06)
[9]p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其研究进展[J]. 张文军,李荣山. 医学综述. 2007(09)
[10]低强度脉冲超声对骨折愈合中BMP-2表达的影响[J]. 潘建成,游逸丰,王大风. 浙江创伤外科. 2007(02)
博士论文
[1]FGFR1对破骨细胞分化成熟与骨吸收功能的调控作用及机制研究[D]. 鲁秀敏.第三军医大学 2008
[2]TGF-β对人牙髓细胞的作用及p38MAPK信号转导的研究[D]. 王凤明.四川大学 2006
硕士论文
[1]低强度脉冲超声波在Bio-Gide膜引导牙周组织再生术中促犬牙周病组织修复效应的探讨[D]. 柴召午.重庆医科大学 2010
[2]低强度脉冲超声波对牙周膜细胞成骨分化影响的初步研究[D]. 周洁.重庆医科大学 2010
[3]TNF-α和PGE2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响[D]. 任莉.第三军医大学 2009
[4]低强度脉冲超声在Beagle犬牙槽骨及颌骨缺损模型中促进骨质修复的初步研究[D]. 冯格.重庆医科大学 2008
[5]低强度脉冲超声对Beagle犬牙周病组织生物学改建效应的实验研究[D]. 董妮.重庆医科大学 2008
本文编号：3004469
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hPDLCs原代培养细胞爬出（×200）
10) 用 75％、85％、95％酒精 1 次，无水乙醇 2 次进行梯度脱水，每次 1min；二甲苯透明；甘油封片，显微镜下观察染色情况并拍照进行记录。2 结果2.1 体外培养的 hPDLCs 形态学及生化特性表现组织块法进行原代培养 7-10 天，可见细胞从组织块中爬出并以组织块为中心呈放射状排列，形成生长晕（图 1.1）；若组织块培养 20 天仍未见细胞爬出，视为无体外生长能力。原代细胞覆盖率达 60%时进行传代分离，传代后细胞均呈长梭形或星形；胞突细长且像周围呈现出数个突起；胞浆丰富均匀；细胞核为圆形或为椭圆形居中,核内可有 2-3 个核仁；细胞间呈束状、栅栏状或旋涡状排列，当生长密集时可出现复层生长。（图 1.2）
图 1.4 波形丝蛋白染色阳性(×100)Fig1.4 Positive immunohistoclmical staining forVimentin on hPDLCs (x 100)图 1.5 角化蛋白染色阴性(×200)Fig 1.5 Negtive immunohistochmicalstaining for Keratin on hPDLCs(×200)3 讨论组织块培养法是将组织小块平铺在培养瓶的底部，细胞自行从组织边缘游出，从而获得取原代细胞的方法。组织块培养法操作简单，污染几率相对较小，培养出来的细胞同源性较高；但该方法周期较长，同时贴壁率较低。马佳音[33]等发现组织块法成功率为 16.67%， 分析原因可能为：细胞不易贴壁； 细胞包裹于组织中，营养及穿透能力有限，出现代谢不佳；组织块中的纤维成分束缚了细胞的游出； 贴壁时，培养液对组织块的浸润不足使细胞受到损伤；培养液中组织碎片代谢物对细胞的生长产生了影响。口腔属于相对污染的环境，收集实验牙后应立即
【参考文献】：
期刊论文
[1]三种组织块法培养人牙周膜细胞的比较研究[J]. 马佳音,胥春,郝轶,张富强. 组织工程与重建外科杂志. 2010(03)
[2]p38 MAPK信号传导通路及其抑制剂的研究现状[J]. 张频捷,朱立新,耿小平. 安徽医药. 2010(05)
[3]p38MAPK抑制对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响[J]. 李瑞霞,肖喜荣,顾超,徐嬿,李斌. 复旦学报(医学版). 2010(01)
[4]三七总皂甙通过P38MAPK信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞的增殖、分化[J]. 李学东,陈斌,郑创义,刘钊勇,杜世新. 中国伤残医学. 2009(04)
[5]p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展[J]. 王国军,刘亚伟,李玉花,姜勇. 生物技术通讯. 2009(03)
[6]牙周韧带细胞植入量与牙周组织再生量关系的动物实验[J]. 马忠雄,闫福华,钟声. 福建医科大学学报. 2008(05)
[7]骨灵片通过p38 MAPK信号通路影响成骨细胞功能的机制[J]. 黄少慧,张娟,李娟,蔡红兵. 南方医科大学学报. 2008(07)
[8]低强度超声对大鼠牙槽骨改建过程中BMP-2表达的影响[J]. 薛慧,彭惠,杨东红,王宏艳,吴立鹏. 黑龙江医药科学. 2007(06)
[9]p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其研究进展[J]. 张文军,李荣山. 医学综述. 2007(09)
[10]低强度脉冲超声对骨折愈合中BMP-2表达的影响[J]. 潘建成,游逸丰,王大风. 浙江创伤外科. 2007(02)
博士论文
[1]FGFR1对破骨细胞分化成熟与骨吸收功能的调控作用及机制研究[D]. 鲁秀敏.第三军医大学 2008
[2]TGF-β对人牙髓细胞的作用及p38MAPK信号转导的研究[D]. 王凤明.四川大学 2006
硕士论文
[1]低强度脉冲超声波在Bio-Gide膜引导牙周组织再生术中促犬牙周病组织修复效应的探讨[D]. 柴召午.重庆医科大学 2010
[2]低强度脉冲超声波对牙周膜细胞成骨分化影响的初步研究[D]. 周洁.重庆医科大学 2010
[3]TNF-α和PGE2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响[D]. 任莉.第三军医大学 2009
[4]低强度脉冲超声在Beagle犬牙槽骨及颌骨缺损模型中促进骨质修复的初步研究[D]. 冯格.重庆医科大学 2008
[5]低强度脉冲超声对Beagle犬牙周病组织生物学改建效应的实验研究[D]. 董妮.重庆医科大学 2008
本文编号：3004469
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