BRD4抑制剂JQ1诱发舌鳞状细胞癌发生免疫原性细胞死亡的初步探究
发布时间：2021-02-04 10:07
目的头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）对多种化疗药呈现出耐受性,免疫抑制是主要原因之一,研究发现通过解除免疫抑制可以改善化疗效果甚至达到完全缓解,因此多种免疫疗法应运而生,除免疫检查点阻滞疗法等以外,另一种比较感兴趣的研究是通过促进肿瘤细胞释放危险相关分子模式（danger-associated molecular patterns,DAMPs）,如细胞膜表面的钙网蛋白（Calreticulin,CALR）和细胞外基质中的ATP及高迁移蛋白l（High Mobility Group Box 1 protein,HMGB1）等,从而增强免疫细胞的成熟、迁移、吞噬及分泌等功能,使其杀伤和吞噬肿瘤细胞,这一过程被称作免疫原性细胞死亡（immunogenic cell death,ICD）,且总是伴有内质网应激信号分子真核翻译起始因子 2a（eukaryotic translation initiation factor 2a,eIF2a）的磷酸化,因此P-eIF2a被视作ICD的生物标记。研究发现一些化疗药、放疗及光动力疗...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１用ＣＣＫ－８法检测Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７细胞的增殖情况，测得ＪＱｌ对Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７细胞的??适宜工浓是４?ｕ?Ｍ和２?ｙ?Ｍ，?０Ｄ以平均士ＳＥＭ表示
后?ＢＲＤ４??的相对ｍＲＮＡ水平明显降低。??１８１?Ｃ？Ｉ２７??（Ａ）?ＪＱ１?（Ｂ）?Ｉ?——??ＤＭＳＯ?＾?８ｈ?２４ｈ￣?｜｜＇°?Ｈ?＿?—■ａ—??＿?＿?ｍ?＿４?］?ｉ?ｊＨ?Ｂｆ｜??麵ｉＭＭＰ?Ｐ＊?Ａｃｔ?ｉｎ?＾?■ｐ＇??（Ｃ）?１?＇１?－?ＳＣＣ７??ｍｒｎｍｍ?ｍｍｍｍ?ｂｒ〇４?．?＼ｆ?ｎ??ＳＣＣ７?ｒ。’?＿?圍圍?ｆｌ??ｍｍ?ｍａｍ?ｍｍ?ｍｍ?Ｐ－ａｃｔｍ」?－Ｊ?＿?＿?丨＿?丨■??，＇＇，??图３－３?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验测得ＪＱｌ作用于Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７后，ＢＲＤ４蛋白表??达水平明显降低，差异有统计学意义。??３．?２?ＪＱ１可诱发Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７细胞中ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７向细胞膜迀移??通过流式细胞术测得经ＪＱ１刺激４ｈ后Ｃａｌ２７细胞膜表面的ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７的??阳性率分别为约８３．?１％和６３．９％，较对照组的１２．３％?（ＣＡＬＲ）和１８．９％?（ＥＲｐ５７）??明显高。ＳＣＣ７细胞膜表面ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７阳性表达率分别为１９．?０％和２３．?６％，经??ＪＱ１作用后其阳性表达率同样明显升高，ＣＡＬＲ约为５７．?６％，?ＥＲｐ５７约为５４．?０％?（图??３．?２－１）；提取膜蛋白，用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ对细胞膜表面的ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的表达情??况进行半定量分析，发现ＪＱ１作用４ｈ后细胞膜上ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的相对蛋白表达??水平均增加（图３．?２－２和图３．?２－３），差异有统计学意义（Ｐ＜０．?００１）；免疫荧光实??验亦发现经ＪＱ１处理后的Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７细胞膜表面的ＣＡＬＲ荧光强度
?山东大学硕士学位论文???Ｃａｌ２７?ＳＣＣ７??應＿■??■■■??ＣＴＲＬ?ＪＱｌ?４ｈ?ＣＴＲＬ?ＪＱ１４ｈ??图３－７在共聚焦显微镜下观察的ＣＡＬＲ在Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７细胞膜表面的表??达情况??然而此时并没有明显的细胞凋亡，直至约２４小时才测得Ａｎｎｅｘｉｎ?ｆ细胞比??例有统计学差异（图３．２－５），且主要为Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ７７?ＡＡＤ细胞，即尚在早期凋??亡阶段，这一现象说明ＪＱ１诱导的ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７在细胞膜上的暴露较为迅速，且??不是磷脂酰丝氨酸暴露的结果。??ＤＭＳＯ?ＪＱ１?８ｈ?ＪＱ１?２４ｈ?ＪＱ１?４８ｈ?＾１２７?＾??牟二?Ｇａｌｅ?Ｐ１?〇ａｔｅ?ｐｔ?＿ｃ，ａｔｅ?Ｐｉ???￣?Ｏａｉｅ?Ｐｉ?８０?？？？??＿龜？丨＃??Ｑ?＃?＾?＾?＾??＾?，ＧＡＴＥ?ｆ’?．‘ＧＡＴＥ?ｐ＿］??．?ｇａｔｅ?ｐｉ?－?６ａｔｅ?ｐｉ?２广广７?Ｅ３?ｅａｒｌｙ?ｓｔａｇｅ??卜，：丨?Ｗ＾＇?ｈ?＃？?１?Ｗ?５０ｌ?■?????ｊ?ｆ?！：??＾！，ｉ?１〇．?＾?Ｓ?議Ｉ??ｊ?ｗ?ａ?，ｊｉ?ｊ?＾?，．？?ｊ．?ｙｔ，．：：』‘．．．ｉ?－ｍ?‘．ｎ?－ｉ?知?，ｕ?ｇｇｇｇｇ?ａＳＳＳ?ｇｇｇｇｇ??Ａｎｎｅｘｉｎｖ?。，，，，??图３－８通过Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ及７－ＡＡＤ对细胞染色发现ＪＱｌ引起的磷脂酰丝氨酸的暴??露远落后于ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７的暴露??２８??
本文编号：3018136
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１用ＣＣＫ－８法检测Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７细胞的增殖情况，测得ＪＱｌ对Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７细胞的??适宜工浓是４?ｕ?Ｍ和２?ｙ?Ｍ，?０Ｄ以平均士ＳＥＭ表示
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本文编号：3018136
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