人CD14基因重组、真核表达及其在牙髓、牙龈炎中作用的实验研究

发布时间：2021-02-15 18:07

　　CD14是内毒素（LPS）的特异性受体。LPS刺激机体产生免疫防御反应首先需要与CD14结合，然后将信号传入细胞内，启动炎症应答。牙髓炎、尖周炎、牙周炎等疾病均是革兰氏阴性厌氧菌为主的混合感染，而革兰氏阴性厌氧菌的主要毒力因子就是LPS，因此推测CD14在牙齿炎性病变过程中起重要作用。CD14在机体中以两种形式存在：一种位于髓细胞膜，称为膜结合CD14（mCD14）；另一种游离于血浆，称为可溶性CD14（sCD14）。sCD14功能尚不十分清楚，据报道高浓度的sCD14可以抑制LPS诱导的炎症应答，基因重组sCD14可能有治疗价值。基于sCD14功能研究需要和潜在的应用价值，用基因工程方法表达sCD14很有意义。本文从CD14的基因入手主要进行了以下实验： 一、CD14基因重组及序列分析 以mCD14基因为模板，采用PCR方法将CD14基因进行了重组：一方面对CD14基因起始密码上游作了真核表达优化突变，引入Kozak序列；另一方面，根据文献报道分别在CD14成熟肽348位和152位截短了CD14基因的3’端序列，以期得到在体外可溶性形式表达的CD14基因。PCR扩增的两个... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

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前言
第一部分 CD14基因重组及序列分析
348">第二部分 用真核细胞系统表达rsCD14348

    实验一 rsCD14³⁴⁸真核表达载体的构建
348基因">    实验二 用COS-7细胞表达rsCD14³⁴⁸基因
348在CHO-dhfr细胞的稳定表达">    实验三 rsCD14³⁴⁸在CHO-dhfr细胞的稳定表达
348及活性鉴定">第三部分 免疫亲和层析纯化rsCD14³⁴⁸及活性鉴定
    实验一 抗sCD14单克隆抗体制备及纯化
    实验二 免疫亲和层析纯化重组sCD14
    实验三 重组sCD14的生物学活性鉴定
    实验四 抗sCD14多克隆抗体制备及纯化
第四部分 牙髓、牙龈炎中CD14功能作用的实验研究
    实验一 牙髓、牙龈组织中CD14的表达研究
    实验二 免疫组织化学方法定位牙髓、牙龈组织中的CD14
文献综述
全文总结
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]用IRES及dhfr构建哺乳动物细胞双表达载体[J]. 刘国奇,陈小密,徐静,于长明,宋宏彬,童贻刚,王海涛.  军事医学科学院院刊. 2000(01)
[2]稳定、高效表达血小板生成素的真核细胞株的构建[J]. 卢柏松,陈琳,徐秀英,柳晓兰,蔡铭杰,林圣采,黄培堂.  军事医学科学院院刊. 1998(03)
[3]大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用[J]. 江智红,杨宇虹,徐来根,杨新颖,夏其昌,李伯良,王德宝.  生物工程学报. 1998(02)
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[5]人补体C1－抑制物基因在COS－7细胞中的表达[J]. 杨红玉,郑珊珊.  中国免疫学杂志. 1996(05)
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本文编号：3035307

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