负载成骨细胞的壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合膜修复大鼠颅骨缺损的实验研究
发布时间：2021-07-19 19:06
牙周病造成牙周附着结构丧失,牙槽骨吸收,是成年人失牙的主要原因,严重影响患者身心健康。因此,牙周附着组织的再生是牙周病治疗的主要目标。目前引导牙周组织再生术（guide tissue regeneration, GTR）取得了较好的效果。它是将一种屏障性材料放于牙根和牙龈瓣之间,阻挡牙龈成纤维细胞和上皮细胞长入,从而使具有再生潜能的牙周韧带细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）优先占据根面空间,依靠其分化形成牙周组织。这种技术从临床上和动物实验中均证实能够形成牙周新附着。然而长期的牙周病损使剩余的牙周韧带细胞数量减少,不能满足完全的修复再生。因此,我们需要补充一定量的种子细胞到牙周缺损区以弥补自身细胞数量的不足。在本课题中,我们将携带增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）基因的大鼠成骨细胞,接种至三维多孔支架壳聚糖/纳米羟基磷灰石（chito san/hydroxyapatite, CS/nHA）膜上,植入大鼠颅顶骨缺损,观察其是否既具有屏障膜功能又能提供细胞来源,为负载种子细胞的壳聚糖...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AIP染色观察到成，丹细胞胞浆内出现红色的沉淀(I勺箭头示)(x400)
山东大学硕十学位沦文组不植入任何材料。用无菌生理盐水冲洗术区，缝合伤口(图7a，7b)。图7a人鼠颅胃，标准骨缺损模型的制备:图7b骨缺损区植入细胞与CS/nHA复合膜)月慢速球钻磨颅骨至直径smm的临界谓·缺损2.3取材与检测:2.3.1标本处理:术后16周，将实验组大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成内固定。取初步固定的大鼠新鲜颅骨标本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切开骨缺损。分别制作石蜡切片和冰冻切片。石蜡切片制作 :0.5MEDTA脱钙液振荡脱钙6周(每2天更换一次脱钙液)，直到脱钙完成。流水充分冲洗后，标本用各级酒精逐级脱水:50%乙醇脱水1小时~70%乙醇2小时一80%乙醇过夜一95%乙醇I脱水lh一95%乙醇111小时一 100%乙醇11小时一 100%乙醇 11lh，取出晾干一二甲苯透明11小时一二甲苯透明H50分钟一浸蜡、包埋，用刀片修整标本周围多余的石蜡以便切片
图7a人鼠颅胃，标准骨缺损模型的制备:图7b骨缺损区植入细胞与CS/nHA复合膜)月慢速球钻磨颅骨至直径smm的临界谓·缺损2.3取材与检测:2.3.1标本处理:术后16周，将实验组大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成内固定。取初固定的大鼠新鲜颅骨标本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切开骨损。分别制作石蜡切片和冰冻切片。石蜡切片制作:0.5MEDTA脱钙液振荡钙6周(每2天更换一次脱钙液)，直到脱钙完成。流水充分冲洗后，标本用级酒精逐级脱水:50%乙醇脱水1小时~70%乙醇2小时一80%乙醇过夜一95乙醇I脱水lh一95%乙醇111小时一100%乙醇11小时一100%乙醇11lh，取晾干一二甲苯透明11小时一二甲苯透明H50分钟一浸蜡、包埋，用刀片修整
【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠骨髓间充质干细胞的培养及示踪优化[J]. 何秀华,李东良,江军,程变巧,杨才生. 解放军医学杂志. 2011(02)
[2]壳聚糖-纳米羟基磷灰石复合材料修复兔骨缺损过程中BMP-2的表达[J]. 汪皖,徐培,吴海珍. 安徽医科大学学报. 2010(04)
[3]大鼠骨髓间充质干细胞活体示踪标记方法的研究现状[J]. 马云霞,宋京翔,涂小煌. 医学综述. 2010(13)
[4]应用GFP基因转染示踪BMSCs在组织工程下颌骨内的分化[J]. 袁捷,韦敏,祁佐良,陈瑾君,崔磊,曹谊林. 中国口腔颌面外科杂志. 2010(02)
[5]骨形态发生蛋白-2基因转染骨髓基质干细胞复合壳聚糖体外构建组织工程软骨的实验研究[J]. 郭庆华,刘强,李平,卢向东. 中国药物与临床. 2010(01)
[6]大鼠颅骨缺损模型在骨组织工程中的应用[J]. 尹宏宇,崔磊,曹谊林. 中国美容医学. 2009(05)
[7]成骨细胞条件培养液对BMSCs诱导分化作用研究[J]. 周昆鹏,陈晓禾,常丽,李秀群,李驯虎,张珏,邓力. 中国修复重建外科杂志. 2009(02)
[8]优化酶消化法体外培养及鉴定SD大鼠的成骨细胞（英文）[J]. 王双利,刘宁,杨淑野,吴昊,查振刚. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(15)
[9]仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架对兔骨缺损的修复[J]. 孔丽君,敖强,王爱军,龚锴,王曦,公衍道,赵南明,张秀芳. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(05)
[10]比较不同来源人成骨细胞的体外培养模式及其生物学特性[J]. 郭宗科,章庆国,李静,张娇. 中国临床康复. 2006(13)
硕士论文
[1]组织化学染色方法在生长板组织学研究中的应用[D]. 刘晓娟.河北医科大学 2007
[2]大鼠脂肪干细胞诱导为成骨细胞三维立体培养的实验研究[D]. 单秀莉.山东大学 2006
[3]纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合BMP再血管化的初步实验研究[D]. 彭超.四川大学 2006
本文编号：3291258
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AIP染色观察到成，丹细胞胞浆内出现红色的沉淀(I勺箭头示)(x400)
山东大学硕十学位沦文组不植入任何材料。用无菌生理盐水冲洗术区，缝合伤口(图7a，7b)。图7a人鼠颅胃，标准骨缺损模型的制备:图7b骨缺损区植入细胞与CS/nHA复合膜)月慢速球钻磨颅骨至直径smm的临界谓·缺损2.3取材与检测:2.3.1标本处理:术后16周，将实验组大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成内固定。取初步固定的大鼠新鲜颅骨标本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切开骨缺损。分别制作石蜡切片和冰冻切片。石蜡切片制作 :0.5MEDTA脱钙液振荡脱钙6周(每2天更换一次脱钙液)，直到脱钙完成。流水充分冲洗后，标本用各级酒精逐级脱水:50%乙醇脱水1小时~70%乙醇2小时一80%乙醇过夜一95%乙醇I脱水lh一95%乙醇111小时一 100%乙醇11小时一 100%乙醇 11lh，取出晾干一二甲苯透明11小时一二甲苯透明H50分钟一浸蜡、包埋，用刀片修整标本周围多余的石蜡以便切片
图7a人鼠颅胃，标准骨缺损模型的制备:图7b骨缺损区植入细胞与CS/nHA复合膜)月慢速球钻磨颅骨至直径smm的临界谓·缺损2.3取材与检测:2.3.1标本处理:术后16周，将实验组大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成内固定。取初固定的大鼠新鲜颅骨标本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切开骨损。分别制作石蜡切片和冰冻切片。石蜡切片制作:0.5MEDTA脱钙液振荡钙6周(每2天更换一次脱钙液)，直到脱钙完成。流水充分冲洗后，标本用级酒精逐级脱水:50%乙醇脱水1小时~70%乙醇2小时一80%乙醇过夜一95乙醇I脱水lh一95%乙醇111小时一100%乙醇11小时一100%乙醇11lh，取晾干一二甲苯透明11小时一二甲苯透明H50分钟一浸蜡、包埋，用刀片修整
【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠骨髓间充质干细胞的培养及示踪优化[J]. 何秀华,李东良,江军,程变巧,杨才生. 解放军医学杂志. 2011(02)
[2]壳聚糖-纳米羟基磷灰石复合材料修复兔骨缺损过程中BMP-2的表达[J]. 汪皖,徐培,吴海珍. 安徽医科大学学报. 2010(04)
[3]大鼠骨髓间充质干细胞活体示踪标记方法的研究现状[J]. 马云霞,宋京翔,涂小煌. 医学综述. 2010(13)
[4]应用GFP基因转染示踪BMSCs在组织工程下颌骨内的分化[J]. 袁捷,韦敏,祁佐良,陈瑾君,崔磊,曹谊林. 中国口腔颌面外科杂志. 2010(02)
[5]骨形态发生蛋白-2基因转染骨髓基质干细胞复合壳聚糖体外构建组织工程软骨的实验研究[J]. 郭庆华,刘强,李平,卢向东. 中国药物与临床. 2010(01)
[6]大鼠颅骨缺损模型在骨组织工程中的应用[J]. 尹宏宇,崔磊,曹谊林. 中国美容医学. 2009(05)
[7]成骨细胞条件培养液对BMSCs诱导分化作用研究[J]. 周昆鹏,陈晓禾,常丽,李秀群,李驯虎,张珏,邓力. 中国修复重建外科杂志. 2009(02)
[8]优化酶消化法体外培养及鉴定SD大鼠的成骨细胞（英文）[J]. 王双利,刘宁,杨淑野,吴昊,查振刚. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(15)
[9]仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架对兔骨缺损的修复[J]. 孔丽君,敖强,王爱军,龚锴,王曦,公衍道,赵南明,张秀芳. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(05)
[10]比较不同来源人成骨细胞的体外培养模式及其生物学特性[J]. 郭宗科,章庆国,李静,张娇. 中国临床康复. 2006(13)
硕士论文
[1]组织化学染色方法在生长板组织学研究中的应用[D]. 刘晓娟.河北医科大学 2007
[2]大鼠脂肪干细胞诱导为成骨细胞三维立体培养的实验研究[D]. 单秀莉.山东大学 2006
[3]纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合BMP再血管化的初步实验研究[D]. 彭超.四川大学 2006
本文编号：3291258
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