转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究

发布时间：2021-07-23 17:28

　　第一部分携带TGF-β1基因重组腺相关病毒载体的构建目的构建携带TGF-β1基因的重组腺相关病毒载体,制备表达TGF-β1基因的重组腺相关病毒rAAV-TGF-β1,检测重组病毒的滴度,为TGF-β1基因的真核表达及临床应用提供实验基础。方法含TGF-β1 cDNA的质粒pcDNA3-TGF-β1和质粒pAAV-MCS用EcoRⅠ+XbaⅠ进行双酶切后连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,获得重组质粒pAAV-MCS-TGF-β1。通过酶切和DNA测序鉴定重组质粒的正确性。采用磷酸钙共沉淀法,以重组质粒pAAV-MCS-TGF-β1和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,产生具有感染性的病毒颗粒rAAV-TGF-β1并检测重组病毒的滴度。结果成功构建携带目的基因TGF-β1的重组质粒pAAV-MCS-TGF-β1,并获得携带TGF-β1基因的重组腺相关病毒rAAV-TGF-β1。重组质粒pAAV-MCS—TGF-β1经双酶切和测序证实TGF-β1基因正确插入载体且序列正确。重组腺相关病毒rAAV-TGF-β1经PCR检测,可见1.2kb大小的TGF-β1基因片段。重组... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pcDNA3质粒结构图

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【参考文献】：
期刊论文
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[6]功能矫形大鼠下颌前伸后髁突胰岛素分布规律的研究[J]. 赖文莉,赵美英,罗颂椒.  中华口腔医学杂志. 1996(02)



本文编号：3299724