重组甲状旁腺激素相关蛋白1-36及其在促进牙槽骨骨形成中的作用

发布时间：2021-11-10 08:41

　　目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone related protein,PTHrP） 1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位（CFU-f）、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。 

【文章来源】：上海口腔医学. 2020,29(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

重组表达质粒的鉴定。M:DL2000 DNA Marker;1-3:p GEX-2TK/PTHr P1-36以P1/P2为引物的PCR扩增产物)

图1 重组表达质粒的鉴定。M:DL2000 DNA Marker;1-3:p GEX-2TK/PTHr P1-36以P1/P2为引物的PCR扩增产物)利用1mmol/L的IPTG诱导3 h，进行大量蛋白表达，GSTrap FF纯化柱纯化可溶性融合蛋白GST-PTHrP1-36，凝血酶切割去除GST，收取PTHrP1-36蛋白后，15%SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白PTHrP1-36，约4 kD；洗脱液洗脱吸附的GST蛋白，大小为26 kD（图4），均与预期相一致。

为了验证重组PTHrP1-36蛋白对骨髓间充质细胞成骨分化的影响，通过重组蛋白处理小鼠原代骨髓间充质细胞，并诱导其向成骨细胞分化，利用ALP、钙化结节和总克隆细胞化学染色，观察重组蛋白对骨髓间充质细胞分化的影响。实验结果显示,ALP阳性的成纤维细胞克隆形成单位（CFU-f)(CFU-fALP）、钙化结节阳性的CFU-f (CFU-fCa)和总CFU-f(Total CFU-f)数目在PTHrP1-36蛋白处理组均较对照组明显增加，幅度达15%～30%（图5A-F），说明重组PTHrP1-36蛋白具有促进骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的作用。图4 重组PTHrP1-36蛋白表达纯化的SDS-PAGE分析。M：标准蛋白Marker;1、3：经凝血酶切除GST后，纯化的PTHrP1-36蛋白；2、4：洗脱液洗脱的GST蛋白

【参考文献】：
期刊论文
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[3]骨质疏松症SD大鼠废用残根对周围牙槽骨组织影响的研究[J]. 李晶,艾红军,洪岩松.  中国医科大学学报. 2015(05)



本文编号：3486951