海藻酸盐凝胶囊化山羊关节盘细胞短期压力下蛋白多糖和Ⅰ型胶原mRNA表达

发布时间：2021-11-27 17:21

　　目的：采用海藻酸钙凝胶囊化山羊TMJ关节盘细胞,建立纤维软骨细胞体外立体培养模型；研究评价不同的持续、间歇短期压力对体外培养的山羊TMJ关节盘细胞外基质中蛋白多糖和Ⅰ型胶原mRNA的表达影响。方法：1.取健康一月龄山羊双侧TMJ关节盘纤维软骨组织,剪碎,0.2%Ⅰ型胶原酶消化过夜获取关节盘纤维软骨原代细胞,接种至培养瓶培养,传至P2代细胞。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化及贴壁率,荧光显微镜下采集细胞生长图像,培养细胞爬片,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定。经鉴定具备正常表型的P2代山羊TMJ关节盘纤维软骨细胞,以5x105/ml密度接种到海藻酸盐溶液中,形成纤维软骨细胞-藻酸钙凝胶复合体三维培养,倒置显微镜下观察凝胶小球内细胞的生长情况；蕃红O与Ⅰ型胶原免疫组化染色,观察蛋白多糖、Ⅰ型胶原的分布。2.凝胶小球随机分为七组,一组设为对照,其余六组经不同持续、间歇压力处理后,取一批凝胶球作钙黄绿素—碘化丙啶的荧光染色进行凝胶球内活、死细胞的测定；各组剩余的样本通过解珠液将凝胶球溶解,重新获取纤维软骨细胞,通过实时荧光定量RT-PCR技术测定细胞外基质中蛋白多糖和Ⅰ型胶原的mRNA的水平表达。结果... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
    1.1 TMJ关节盘的结构和组成
    1.2 TMJ关节盘细胞、细胞基质与力学特性的联系
    1.3 TMJ关节盘纤维软骨细胞力学的生物学反应
    1.4 细胞海藻酸钠凝胶复合三维培养的应用
    1.5 荧光定量RT-PCR技术与应用
    1.6 小结
实验一 山羊TMJ关节盘细胞的获取和藻酸盐囊化关节盘细胞三维培养环境的建立
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
    2.5 结论
实验二 海藻酸盐凝胶囊化关节盘细胞短期压力下蛋白多糖和Ⅰ型胶原mRNA表达
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
    3.3 统计方法
    3.4 实验结果
    3.5 讨论
    3.6 结论与展望
参考文献
综述
    参考文献
在学期间的研究成果
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊颞下颌关节盘细胞类型及分布表征在组织构建中的设计意义[J]. 舒维娜,康宏,张卫平,李欣,包广洁.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(46)
[2]3种加载方式下正常人下颌骨三维有限元应力分布分析[J]. 孙健,张富强,王冬梅,于嘉,王成焘.  上海口腔医学. 2004(01)

硕士论文
[1]动态和静态压力作用对山羊颞下颌关节盘细胞凝胶组织基质代谢的影响[D]. 柯一凡.兰州大学 2010



本文编号：3522734