新型信号分子Nell-1促进牙髓干细胞成血管能力的相关研究

发布时间：2021-12-28 05:54

　　背景和目的:Nell-1（Nel-like 1）是一种新型信号分子,它在成骨细胞分化、骨形成及骨再生过程中起到重要的正调控作用。本课题组前期研究发现,Nell-1可以促进成牙本质细胞分化、牙本质形成,促进牙髓干细胞神经向分化。有研究显示,脐静脉内皮细胞及牙髓干细胞共培养可以促进血管向分化。本课题旨在通过体内及体外研究,检测Nell-1是否在牙髓干细胞血管向分化过程中起调节作用。材料方法:1.人牙髓干细胞的分离、培养及鉴定从无龋坏、无根尖周病的智齿中分离获得牙髓干细胞。利用流式细胞术来检测牙髓干细胞表面的间充质干细胞标记物及造血干细胞标记物的表达。通过成骨及成脂实验来检测其多向分化能力。2.将牙髓干细胞单独培养或与脐静脉内皮细胞共培养时,Nell-1对其血管向分化的体外研究首先利用细胞免疫荧光技术检测Nell-1在牙髓干细胞及脐静脉内皮细胞中的表达及分布情况。利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR,quantitative real-time polymerase chain reaction）、酶联免疫吸附反应（ELISA,enzyme-linked immunosorbe... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１牙髓细胞克隆形成能力检测（ｘ４０）??单个牙髓细胞呈集落生长，由中心向四周放射生长??

图２：?ＮｅＵ－丨对于ＤＰＳＣｓ、ＨＵＶＥＣｓ的增殖影响及亚细胞定位??Ａ－Ｂ：?ＣＣＫ－８?增殖实验，５０、１００、２００ｎｇ／ｍｌＮｅｌｌ－ｌ?对于?ＤＰＳＣｓ?（Ａ）、ＨＵＶＥＣｓ（Ｂ）增殖未见明显影响??Ｃ＿Ｊ：?Ｎｅｌｌ－１在ＤＰＳＣｓ、ＨＵＶＥＣｓ的定位，Ｎｅｌｌ－１在ＤＰＳＣｓ?（Ｅ）、ＨＵＶＥＣｓ（Ｉ）的细胞核中呈颗粒状表达，??ＤＡＰＩ进行复染（Ｄ、Ｈ），组合Ｎｅｌｌ－１染色、ＤＡＰＩ染色图片（Ｆ、Ｊ）?（＜２?

?山东大学硕士学位论文???Ａ?Ｂ??古?１．５－｜?｜??０?ｎｇ／ｍｌ?Ｎｅｌｌ－１?丄?？?＾?ｎｇ／ｍｌ?Ｎｅｌｌ－１??ｇ?５０?ｎｇ／ｍｌ?Ｎｅｌｌ－１?＊＊＊?５０?ｎｇ／ｍｌ?ＮｅｌＭ?了??〇?ｉ?ｉ?ｉ?＊?Ｓ?１?６－?１??％?１０?ｒ１！?ｒ＾ｌ?ｆ＾ｌ?［＊１！?Ｉ??Ｉ?１?：；?ｊ?Ｓ４－??ｓ?°－５＇?ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?？，??ｉ?．．．．．．１＾－?．１?Ｉ〇ｃｉ?ｒ：，ｉ?４?ｒｉｉ??＾?＾?＾?＾?＾?＾?＾?＾?＾?＾??Ｔｉｍｅ?Ｔｉｍｅ??Ｃ?Ｄ??ｊｃ?４－ｉ?］?０?ｎｇ／ｍｌ?Ｎｅｌｌ－１??ＧＡＰＤＨ?儀？?籲＾?編？?＾?＾?５０?ｎｇ／ｍｌ?Ｎｅｌ！－１??０＜ｘ＞＾?ｉ３－。１０—１１?＊ｉ??ｄａｙ１?ｄａｙ２?ｄａｙ３?｜?２?ｌｌ??Ｆｌｋ，?ｒｎｍｍ?ｍｍｍ?ｉ?ｒ｜｜?ｌｌ?．｜｜?ｉ＼ｍ??ＧＡＰＤＨ?■？孀ｉ?〇．Ｌ?．ｕｕ＿ＬＵ「：：，：！＊ＬＬｈ?ＩＵ．＿??ｗ，＇＇ｚ?ａ?ｙ?ｙ?ｚ?Ｚ??ｄａｙ７?ｄａｙ?１４?Ｔｉｍｅ??图３：?ＤＰＳＣｓ组血管生成相关标志物的基因和蛋白表达。??５０ｎｇ／ｍ丨Ｎｅｌｌ－１在第３、７、Ｕ天促进ＶＥＧＦ基因表达，在第３、７天促进Ｆｌｋ－１基因表达。??５０和１００?ｎｇ／ｍｌＮｅｌｌ－ｌ在笫３、７天促进Ｆｌｋ－１蛋丨丨表达。??＊ｐ＜０．０５，?＊＊／７＜０．０１，＊＊＞＜０．００１，＊＊＊＊ｐ＜０．０００１??２５??

【参考文献】：
期刊论文
[1]牙髓血运重建术治疗年轻恒牙牙髓和根尖周病变的疗效观察[J]. 李启期,李琦,唐小雪,吕锡旌.  农垦医学. 2019(02)
[2]组织工程技术在牙髓组织再生中的研究进展[J]. 李琳,王佐林.  口腔颌面外科杂志. 2014(05)
[3]根尖牙乳头干细胞和人脐静脉血管内皮细胞联合培养对牙髓组织成血管能力的影响[J]. 袁长永,王鹏来,张成飞,刘宗响,罗三莲.  上海口腔医学. 2014(05)
[4]血管内皮细胞体外三维培养方法的比较[J]. 唐坚清,张声,林建银,黄培生.  福建医科大学学报. 2007(05)
[5]人牙髓细胞原代培养方法的研究[J]. 赵瑚,陈治清,白薇.  华西医科大学学报. 2002(02)



本文编号：3553531