静磁场对SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的影响研究

发布时间：2017-07-14 13:08

本文关键词：静磁场对SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的影响研究

【摘要】：[目的] 建立静磁场作用下SD乳鼠原代下颌髁突软骨细胞(mandibular condylar chondrocyte,MCC)和鼻中隔软骨细胞(nasal septal chondrocyte,NSC)体外培养模型,观察静磁场对髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的影响及差异,为后续深入研究静磁场对髁突软骨和鼻中隔软骨形成过程的影响提供指导,为进一步研究静磁场对颌面部生长发育的影响提供理论基础。[方法]取出生1-3天的SD乳鼠髁突软骨和鼻中隔软骨,用机械分离和酶联消化法获取原代细胞,在相同培养条件下进行原代培养和鉴定。分别加载强度为160mT、280mT、360mT的静磁场,在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况。通过观测磁场对髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞贴壁生长的影响,并且采用MTT(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)比色法筛选出最佳磁场强度。使用免疫组化染色检测两种软骨细胞基质内Ⅱ型胶原(Type Ⅱ collagen, Col Ⅱ)表达的差异。通过甲苯胺蓝染色法检测细胞外基质中糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG)的含量。实时荧光定量PCR (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测加载磁场后两种软骨细胞外基质中Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen, Co Ⅲ)和聚集蛋白多糖(AGG, aggrecan) mRNA的表达。探讨静磁场对体外培养髁突和鼻中隔软骨细胞分泌细胞外基质功能的影响。[结果]采用相同的消化方式及培养条件成功培养出原代髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞,在细胞大部分贴壁后,加载磁场继续培养。分别加载160mT、280mT、360mT的静磁场,通过观察细胞形态及贴壁情况,采用MTT比色法选取细胞增殖最多以及细胞生长良好的磁场强度280mT为最佳磁场强度,并作为后续实验的磁场强度。同时设置对照组,四组软骨细胞在第3天、5天、8天时进行Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色,染色结果均呈阳性,两种细胞加载磁场组均较空白组阳性率高。相同时间点,两种染色中鼻中隔软骨细胞阳性表达均高于髁突软骨细胞。两种软骨细胞在培养第3天、5天、8天时对细胞外基质中的Ⅱ型胶原和AGG的mRNA表达进行检测,发现四组软骨细胞Ⅱ型胶原和AGGmRNA的表达量均随细胞培养时间的增加而有所增高,两种细胞加载磁场组均较空白组表达量多,相同时间点鼻中隔软骨细胞合成Ⅱ型胶原、AGG的能力均高于髁突软骨细胞。[结论]1.本实验成功建立静磁场对SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性影响的研究模型。2.160mT、280mT、360mT三个磁场强度均可以促进软骨细胞的增殖,且280mT对两种软骨细胞的促进增殖作用最为明显,细胞生长状况良好,选定280mT为最佳磁场强度。3.加载静磁场后髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞Ⅱ型胶原和AGG mRNA的表达,GAG的合成变化趋势基本一致,静磁场对三者的合成均具有促进作用,且鼻中隔软骨细胞Ⅱ型胶原、GAG和AGG的表达量多于髁突软骨细胞。可以通过加载静磁场影响两种软骨细胞外基质的合成,从而影响二者的生物学特性。髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞对静磁场的反应存在差异,这些可能与二者的形成机制及生物学特性密切相关。
【关键词】：髁突软骨细胞 鼻中隔软骨细胞 静磁场 Ⅱ型胶原 糖胺聚糖 聚集蛋白多糖
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781
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