采用组织芯片方法筛选口腔黏膜白斑恶变相关蛋白

发布时间：2017-09-13 19:40

  本文关键词：采用组织芯片方法筛选口腔黏膜白斑恶变相关蛋白

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【摘要】：目的:口腔黏膜白斑(Oral leukoplakia,OLK)是指口腔内白色病变而未被诊断为其他的具体疾病者,如扁平苔藓、白色水肿等。口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是世界上第六常见的癌症,占口腔恶性肿瘤的90%以上。世界上每年因口腔鳞状细胞癌发病死亡的病例有将近500,000例,并且其预后较差,5年生存率约为50%左右。口腔鳞状细胞癌主要是由口腔癌前病变,尤其是口腔黏膜白斑受烟草等致癌物质反复刺激所致。然而,口腔黏膜白斑恶变为口腔鳞状细胞癌的机制目前还不明确。因此寻找口腔黏膜白斑恶变的分子标志物,对预防口腔鳞状细胞癌的发生和早期诊断具有重要的现实意义。在本次工作中,我们前期建立了口腔鳞状细胞癌的细胞模型OSCC-BD细胞系,通过基因芯片筛选出口腔黏膜白斑细胞系及其诱导恶变的OSCC-BD细胞系之间的差异基因组,经过RNA水平的验证,并进一步在这两种细胞系及临床病理组织中进行验证,以寻找口腔黏膜白斑恶变的分子标志物,为全面揭示口腔黏膜白斑恶变机制及早期治疗靶点提供新线索。方法:分别体外培养口腔黏膜白斑细胞及其诱导恶变的OSCC-BD细胞,提取两种细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测Protein X和Protein Y在两种细胞系中的表达情况。进一步选取中国医学科学院肿瘤医院病理科180例口腔鳞状细胞癌患者石蜡包埋临床组织,构建口腔鳞癌组织及其癌旁正常组织的临床组织芯片,通过免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测Protein X和Protein Y在OSCC癌组织及癌旁正常组织间的表达差异,并分析其表达情况与临床病理特征之间的关系。结果:采用WB检测结果提示:Protein X在口腔黏膜白斑细胞诱导恶变的OSCC-BD细胞中高表达,在癌前的口腔黏膜白斑细胞细胞中不表达;Protein Y在OSCC-BD细胞中不表达,在癌前的口腔黏膜白斑细胞细胞中高表达。采用IHC在临床组织芯片中的检测结果提示:Protein X的表达主要位于细胞质中,Protein X在OSCC癌组织及其癌旁正常组织中的阳性表达率分别为75%(135/180)和39%(71/180),Protein X在OSCC癌组织中的表达显著高于其在癌旁正常组织中的表达,两组间有统计学差异(P0.001);Protein Y的表达主要位于细胞核中,Protein Y在OSCC癌组织及其癌旁正常组织中的阳性表达率分别为20%(35/180)和33%(60/180),Protein Y在这两种组织中的表达有统计学差异(P=0.002,P0.05)。结论:Protein X可能积极参与了口腔黏膜白斑恶变的过程,Protein Y对恶变可能有一定的抑制作用,本研究为进一步探索口腔黏膜白斑恶变的相关分子标志物和早期治疗靶点提供了研究基础和科学依据。
【关键词】：口腔黏膜白斑 口腔鳞状细胞癌 免疫组化 蛋白免疫印迹 Protein X Protein Y
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.5
【目录】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 材料和方法15-23
• 1.实验材料15-20
• 1.1 研究对象15-16
• 1.2 细胞株及培养条件16
• 1.3 主要试剂16-17
• 1.4 重要试剂的配制17-18
• 1.5 主要仪器设备18-20
• 2.研究方法20-23
• 2.1 蛋白免疫印迹（Western Blotting，WB）检测细胞模型中蛋白表达20-21
• 2.2 免疫组织化学法（Immunohistochemistry，，IHC）检测临床组织中蛋白表达21-22
• 2.3 统计分析22-23
• 结果23-26
• 1.Protein X和Protein Y在DOK恶变细胞模型中的表达23
• 2.Protein X和Protein Y在临床组织芯片中的表达23-26
• 讨论26-30
• 结论30-31
• 参考文献31-34
• 综述 组织芯片与肿瘤生物标志物研究进展34-51
• 参考文献44-51
• 附录51-52
• 致谢52-53

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本文编号：845530