MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

发布时间：2017-09-24 11:32

  本文关键词：MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

  更多相关文章： 特定序列寡核苷酸MT01 牙龈卟啉单胞菌 成骨相关因子 人成骨样细胞MG63

【摘要】：牙周炎被认为是一种由于局部免疫失衡导致的牙周组织破坏性疾病,疾病的进展及严重程度与宿主自身的免疫性炎症反应密切相关。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)通过逃避宿主对细菌的先天性免疫反应、分泌毒力因子等对牙周组织产生破坏作用,是目前公认的牙周致病菌。体外研究表明,Pg能够入侵成骨细胞抑制成骨细胞的成熟和矿化,降低牙槽骨骨形成,导致牙槽骨吸收。因此,抵御Pg对成骨细胞的影响,对治疗牙周炎具有临床意义。MT01是依据人线粒体DNA序列设计的免疫抑制性寡脱氧核苷酸,可抑制由Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)激活引起的机体固有免疫应答反应。我们在前期研究中证实,MT01能够减少实验性大鼠牙周炎导致的牙槽骨吸收;体外研究表明,MT01可上调人成骨样细胞MG63内Runx2、SP7等成骨相关因子的基因表达水平,促进成骨细胞分化。MT01作为一种免疫抑制剂,是否对感染状态中的成骨细胞的成骨分化具有影响作用,目前尚未经证实。本研究拟通过检测MT01干预下,Pg感染人成骨样细胞MG63后特异性成骨相关因子Runx2及SP7的m RNA表达水平,探讨MT01对感染状态下的成骨细胞成骨分化作用是否具有影响。结果发现在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子Runx2,SP7m RNA的表达,说明在牙周致病菌感染的条件下,MT01依然可以促进成骨细胞的成骨向分化。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1μg·m L-1的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3 h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24 h特异性成骨相关因子Runx2,SP7 m RNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7 m RNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7 m RNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。
【关键词】：特定序列寡核苷酸MT01 牙龈卟啉单胞菌 成骨相关因子 人成骨样细胞MG63
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.42
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词表11-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 文献综述14-20
• 2.1 Pg与牙周炎关系的研究进展14-17
• 2.1.1 Pg概述14-15
• 2.1.2 Pg与牙周炎的关系15-17
• 2.2 MT01在牙周炎方向的研究进展17-20
• 2.2.1 MT01概述17-18
• 2.2.2 MT01在牙周炎方向的相关研究18-20
• 第3章 实验研究20-28
• 3.1 实验仪器和试剂20-22
• 3.1.1 主要材料和试剂20
• 3.1.2 主要仪器和设备20-21
• 3.1.3 试剂配制21-22
• 3.2 实验方法22-28
• 3.2.1 人成骨样细胞MG63的培养22
• 3.2.2 牙龈卟啉单胞菌Pg的培养22
• 3.2.3 实验分组22-23
• 3.2.4 提取细胞总RNA23-24
• 3.2.5 逆转录反应（RT）24-25
• 3.2.6 实时定量PCR检测特异性成骨相关因子的表达25-28
• 第4章 实验结果28-32
• 4.1 牙龈卟啉单胞菌的培养28
• 4.2 人成骨样细胞MG63的形态学观察28-29
• 4.3 无感染状态下，MT01上调成骨细胞MG63内Runx2、SP7 mRNA的表达29-30
• 4.4 在牙周致病菌Pg感染状态下，，MT01上调成骨细胞MG63细胞内Runx2、SP7 mRNA的表达30-32
• 第5章 讨论32-37
• 5.1 特异性成骨相关因子33-34
• 5.2 MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响34-37
• 第6章 结论37-38
• 参考文献38-47
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果47-50
• 作者简介47
• 参与的课题47
• 发表文章47-48
• 导师简介48-50
• 致谢50-51

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本文编号：911176