高糖调节牙周相关细胞多向分化潜能的初步研究

发布时间：2017-10-05 12:39

  本文关键词：高糖调节牙周相关细胞多向分化潜能的初步研究

  更多相关文章： 牙周膜韧带细胞 牙龈成纤维细胞 成骨分化 成软骨分化 成脂分化 高糖

【摘要】：目的:通过体外培养获得人牙周膜韧带细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)和人牙龈成纤维细胞(Human gingival fibroblasts,HGFs),对比这两种牙周相关细胞成骨、成软骨以及成脂向分化潜能的差异,观察不同葡萄糖浓度对这两种细胞多向分化潜能的影响,探索其作用机制,从而为组织再生和糖尿病患者的牙周炎治疗提供更广阔的思路。方法:1.经志愿者知情同意后,在天津医科大学口腔医院颌面外科收集因正畸需要拔除的健康双尖牙以及获得拔除埋伏阻生智齿时的牙龈组织,运用酶消化结合组织块法培养HPDLCs,运用组织块贴壁法培养HGFs,选择3-4代的细胞。2.牙周相关细胞多向分化潜能的差异比较。对HPDLCs和HGFs进行成骨、成软骨、成脂诱导。用茜素红染色、阿利新蓝染色以及油红O染色分别检测它们的成骨、成软骨及成脂分化能力。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLCs和HGFs中相关标志基因骨钙素(osteocalcin,OCN)、runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、I型胶原蛋白(collagen 1,Col 1)、X型胶原蛋白(collagen 10,Col 10)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(peroxisome proliferator-activated receptor gamma 2,PPARγ2)m RNA的表达。3.检测不同浓度的糖(5.5、15、25 mmol/l)对两种细胞成骨分化能力的影响。7天和14天提取RNA,运用real-time PCR检测成骨相关基因的表达,28天进行茜素红染色。4.检测不同浓度的糖(5.5、15、25 mmol/l)对两种细胞成软骨分化能力的影响。7天和14天提取RNA,运用real-time PCR检测成软骨相关基因的表达,14天进行阿利新蓝染色。5.检测不同浓度的糖(5.5、15、25mmol/l)对两种细胞成脂分化能力的影响。7天和14天提取RNA,运用real-time PCR检测成脂相关基因的表达,21天进行油红O染色。结果:1.倒置显微镜下观察HPDLCs培养至第5-9天,可见少量的长梭形细胞从组织块周围爬出,围绕组织块周围呈放射状排列,传代后细胞生长迅速。HGFs培养至3-7天,有单个细胞爬出组织块,传代后则趋于一致的长梭型,生长迅速。2.成骨诱导两种细胞培养至28天时,细胞周围均有红染钙结节形成,HPDLCs形成的钙结节明显多于HGFs,培养至7天和14天的两种细胞中均有OCN、RUNX2、Col 1的表达,HPDLCs表达量高于HGFs(P0.01)。成软骨诱导两种细胞14天时阿利新蓝染色均为阳性,但HGFs中Col 10的表达高于HPDLCs(P0.01)。成脂诱导21天时,两种细胞中可见红色脂肪滴形成,但HPDLCs形成的脂肪颗粒明显少于HGFs,培养至7天和14天的HGFs中PPARγ2表达明显高于HPDLCs(P0.01)。3.随着糖浓度的升高,成骨向诱导两种细胞至28天,两种细胞周围的红染钙结节数量越少;培养至7天和14天的两种细胞进行real-time PCR检测,OCN、RUNX2和Col 1的表达随着糖浓度的升高而降低(P0.01)。4.成软骨向诱导两种细胞至14天,随着糖浓度的升高,两种细胞的阿利新蓝染色阳性减弱;培养至7天和14天的两种细胞进行real-time PCR检测,Col 10和聚集蛋白聚糖(aggrecan,AGR)的表达随着糖浓度的升高而降低(P0.01)。5.成脂向诱导两种细胞至21天,随着糖浓度的升高,形成的脂肪颗粒越明显,但HPDLCs形成的脂肪颗粒明显少于HGFs;培养至7天和14天的两种细胞进行real-time PCR检测,PPARγ2的表达随着糖浓度的升高而升高。结论:1.HPDLCs和HGFs均有成骨、成软骨以及成脂向的分化能力。2.HPDLCs的成骨向能力较HGFs强,HGFs的成软骨向和成脂向能力强于HPDLCs。3.高糖抑制HPDLCs和HGFs的成骨向和成软骨向分化能力。4.高糖促进HPDLCs和HGFs的成脂向分化能力。
【关键词】：牙周膜韧带细胞 牙龈成纤维细胞 成骨分化 成软骨分化 成脂分化 高糖
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.4
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、人牙龈成纤维细胞和人牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较15-31
• 1.1 对象和方法15-22
• 1.1.1 主要设备与仪器15-16
• 1.1.2 主要试剂16
• 1.1.3 方法16-22
• 1.2 结果22-28
• 1.2.1 HGFs的原代培养22
• 1.2.2 HPDLCs的原代培养22-23
• 1.2.3 茜素红染色结果23
• 1.2.4 阿利新蓝染色结果23-25
• 1.2.5 油红O染色结果25
• 1.2.6 RT-PCR检测成骨、成脂、成软骨相关基因的表达25-28
• 1.3 讨论28-29
• 1.4 小结29-31
• 二、高糖对牙周相关细胞成骨向分化能力的影响31-42
• 2.1 对象和方法31-34
• 2.1.1 主要设备与仪器31
• 2.1.2 主要试剂31
• 2.1.3 主要试剂配制31-32
• 2.1.4 方法32-34
• 2.2 结果34-39
• 2.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成骨诱导下茜素红染色结果34-35
• 2.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成骨诱导下real-time PCR检测成骨相关基因的表达35-39
• 2.3 讨论39-40
• 2.4 小结40-42
• 三、高糖对牙周相关细胞成软骨向分化能力的影响42-51
• 3.1 对象和方法42-45
• 3.1.1 主要设备与仪器42
• 3.1.2 主要试剂42
• 3.1.3 主要试剂配制42-43
• 3.1.4 方法43-45
• 3.2 结果45-49
• 3.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成软骨诱导下阿利新蓝染色结果45-46
• 3.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成软骨诱导下real-time PCR检测成软骨相关基因的表达46-49
• 3.3 讨论49-50
• 3.4 小结50-51
• 四、高糖对牙周相关细胞成脂向分化能力的影响51-58
• 4.1 对象和方法51-53
• 4.1.1 主要设备与仪器51
• 4.1.2 主要试剂51-52
• 4.1.3 主要试剂配制52
• 4.1.4 方法52-53
• 4.2 结果53-56
• 4.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成脂诱导下油红O染色结果53-55
• 4.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖浓度成软骨诱导下real-time PCR检测成脂相关基因的表达55-56
• 4.3 讨论56-57
• 4.4 小结57-58
• 结论58-59
• 参考文献59-64
• 发表论文和参加科研情况64-65
• 综述 IL-6 在2型糖尿病和牙周炎中的作用65-73
• 综述参考文献70-73
• 致谢73

【参考文献】

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本文编号：976863