静电纺纤维负载共培养细胞膜片构建组织工程关节盘的实验研究
本文关键词：静电纺纤维负载共培养细胞膜片构建组织工程关节盘的实验研究
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【摘要】：实验目的:建立PLGA静电纺丝支架负载共培养颞下颌关节盘细胞与滑膜干细胞细胞膜片的实验模型;探讨此模型中组织工程三要素间的相互作用关系,为重建颞下颌关节盘提供新思路。实验方法:本实验将兔滑膜干细胞与兔颞下颌关节盘细胞以0:1、1:1、1:0比例培养,利用Vc诱导成细胞膜片,并将细胞膜片与PLGA静电纺纤维以类似“三明治”的形式负载,分别在不含TGF-β(0ng/ml)(非诱导组)与含TGF-β(10ng/ml)(诱导组)的成软骨诱导液中培养14天后,收集样品,PicogreenDNA定量分析诱导后细胞数目,DMMB法检测细胞外基质中糖胺聚糖分泌水平,免疫荧光染色检测II型胶原分泌水平及RT-PCR检测成软骨分化相关基因(Col1a1,Col2a1,Sox-9,Runx-2)的表达水平;实验结果:诱导组GAG沉积量显著高于非诱导组(P0.01),共培养组GAG/DNA接近颞下颌关节盘组水平(P0.05)。免疫荧光显示,II型胶原的分泌在诱导组中也明显高于非诱导组。RT-PCR结果表明经TGF-β诱导后,单独培养组成软骨分化相关基因(Col2a1,Sox-9)的表达水平均增高(P0.01)。而共培养组SOX9表达水平表现为降低(P0.01),Col2a1表达水平却表现为升高(P0.01)。实验结论:PLGA静电纺丝支架负载共培养细胞膜片模型可形成具有一定形态结构的类软骨组织,在TGF-β作用下表现出明显的软骨细胞表型,细胞外基质水平也有上调,但其作用机理仍需进一步研究。
【关键词】：颞下颌关节盘 细胞膜片 共培养 静电纺丝 组织工程
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R782.6
【目录】：
- 摘要4-5
- Absrract5-7
- 英文缩略词表7-10
- 第1章 引言10-15
- 1.1 组织细胞来源及共培养模式11-12
- 1.2 支架材料12-13
- 1.3 生长因子13-15
- 第2章 正文15-33
- 2.1 实验材料15-17
- 2.1.1 实验动物15
- 2.1.2 主要仪器与设备15-16
- 2.1.3 实验试剂表16
- 2.1.4 实验试剂的配制16-17
- 2.2 实验方法17-22
- 2.2.1 兔来源滑膜间充质干细胞的分离和培养17-18
- 2.2.2 兔来源颞下颌关节盘细胞的分离和培养18-19
- 2.2.3 PLGA电纺支架制备19
- 2.2.4 SEM观察PLGA电纺支架19
- 2.2.5 细胞膜片的制备19
- 2.2.6 细胞膜片与静电纺丝PLGA纤维膜负载19-20
- 2.2.7 DMMB染色法定量检测GAG20-21
- 2.2.8 免疫荧光染色21
- 2.2.9 实时定量RT-PCR21-22
- 2.2.10 统计学分析22
- 2.3 实验结果与分析22-27
- 2.3.1 细胞形态特点22-23
- 2.3.2 静电纺纤维特点23
- 2.3.3 各组组织样品大体观察23-24
- 2.3.4 GAG定量24-25
- 2.3.5 免疫荧光结果25-26
- 2.3.6 RT-PCR结果26-27
- 2.4 讨论27-33
- 2.4.1 关于细胞膜片的讨论27-28
- 2.4.2 关于湿性静电纺丝支架的讨论28-29
- 2.4.3 关于共培养模式和生长因子的讨论29-33
- 第3章 结论33-34
- 参考文献34-40
- 作者简介40-41
- 致谢41-42
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，本文编号：995245
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