2013年济南市麻疹病毒的基因型及流行状况分析

发布时间：2017-05-16 07:01

  本文关键词：2013年济南市麻疹病毒的基因型及流行状况分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[研究背景] 麻疹是由麻疹病毒引起的一种以发热、呼吸道卡他症状和全身斑丘疹为特征的急性呼吸道传染病,病后有持久免疫力。是我国法定的丙类传染病。 60年代初我国麻疹减毒活疫苗问世,随着扩大免疫规划的开展,麻疹流行基本上得到控制。但近些年来,由于麻疹病毒的基因变异,又导致麻疹发病率的回升,并且年龄分布也有所改变。随着改革开放、经济发展加快,同时人口流动增加,部分儿童麻疹疫苗漏种或免疫失败,加上初免后随着年龄增长而免疫力逐渐降低等原因,致使麻疹小规模流行时有发生。 麻疹病毒是单股负链RNA病毒,目前发现8个基因组(A-H)23个基因型(A,B1-3,Cl-2, D1-10, E,F,Gl-3, H1-2),具有六个结构基因编码六个主要结构蛋白。其中N基因C末端456bp序列为变异度最大的基因片段,是WHO规定鉴定基因性别所需的最少序列。 1993年～2012年我国共分的2756株麻疹病毒分离株,发现6个基因型,其中H1为绝对优势流行株,即我国的本土株。徐文波等按2%基因变异划分基因亚型,将中国的优势流行株H1基因型毒株划分为3个亚型：H1a、H1b、H1c。其中Hla亚型病毒是中国流行的主要亚型病毒,H1b占第2位,Hlc亚型病毒的流行已由1993～1994年的强势转为1995～2012年的弱势。 现阶段,有关麻疹病毒的基因变异、现行疫苗的预防作用及成人麻疹等问题成为国内外研究的热点,WHO要求将消灭麻疹作为无脊髓灰质炎地区的下一个目标,对麻疹病毒的监测和研究变得更加紧迫。因此,济南市麻疹病毒的监测工作需要继续加强开展。2013年之前济南市对麻疹病毒的研究局限于血清学监测和免疫水平监测方面,对麻疹本土流行株的基因分型以及对抗原漂移的阐述工作开展较少,现有必要从分子流行病学方面深入研究其对麻疹病毒的传播和流行的影响,阐明我市麻疹野毒株的抗原变异特点。本篇论文从基因变异、病毒流行、抗体水平这三点着手研究,为加速我国麻疹防控提供强有力的科学依据。 [研究目的] 1.了解2013年济南市麻疹病毒野毒株的基因型及基因变异特点。 2.描述2013年济南市麻疹病毒的“三间分布”特征,分析麻疹病毒的流行趋势。 3.了解麻疹病毒在健康人群中的抗体水平,为麻疹的防控提供科学依据。 [研究方法] 一.麻疹野毒株基因变异特征研究方法 1.采集2013年济南市疑似麻疹患者的咽拭子和尿液标本,用荧光PCR方法进行鉴定,对麻疹病毒阳性的样本使用Vero-Slam细胞分离病毒。 2.提取病毒培养液中的RNA,用一步RT-PCR方法扩增麻疹病毒编码核蛋白(nucleoprotein)的N基因C末端456bp核苷酸片段,扩增产物直接测序后使用DNAstar软件将测序结果与国际标准株比对并进行生物信息学分析。 3.使用MEGA软件将测序结果与同时期国内、国外的野毒株序列结果构建麻疹野毒株的遗传进化树,分析亲缘关系。 二.麻疹病毒流行趋势的研究方法 1.依照《全国麻疹监测方案》2009年版的指示,及时对麻疹病例的信息上报中国疾病预防控制中心疾病监测信息系统并进行结果录入。 2.将来自于中国疾病预防控制中心疾病监测信息系统的传染病报告信息管理系统的麻疹病例的信息进行归纳整理。 3.使用Excel对疫情资料进行数据分析,使用Epi-Info软件绘制病例的地理分布,使用SPSS软件对数据进行统计学分析。了解济南市2013年麻疹病例在时间、地区、人群的“三间分布”,掌握麻疹病毒在济南市的疫情流行情况及变化趋势。 4.对麻疹病例的免疫史进行总结分析。 5.对麻疹病例的临床症状数据进行统计分析。 三.麻疹病毒在健康人群中抗体水平的分析方法 1.使用酶联免疫方法对健康人群血清中的麻疹抗体(IgG)水平进行检测,探讨不同地区、不同人群的麻疹减毒活疫苗对流行病毒株的保护效果。 2.使用酶联免疫方法对适龄儿童免疫前后血清中的麻疹抗体(IgG)水平进行检测,分析免疫成功率。 3.使用SPSS软件对数据进行统计学分析。 [研究结果] 一.麻疹野毒株基因变异特征研究结果 1.采集2013年济南地区的麻疹疑似病例标本,共151份,其中咽拭子91份,尿标本60份,经荧光PCR检测得到阳性咽拭子样本30份,阳性率为33.33%,阳性尿标本4份,阳性率为6.67%。30份麻疹病毒阳性咽拭子中分离到19株麻疹病毒,4份尿标本中分离到2株麻疹病毒。21份阳性毒株中咽拭子标本和尿标本均来自不同病例,无重合。 2.21株麻疹野毒株经对N基因C末端456bp的RT-PCR进行同源性分析证实均为H1a基因型,其中未发现疫苗相关株(A基因型),表明H1a亚型为2013年济南市优势流行株。以麻疹病毒H1a标准株(china93-2)的相应核苷酸以及核苷酸序列推导的氨基酸序列为标准,21个标本的456个核苷酸中有9处基因突变属于同义突变。遗传距离为0-0.017。 3.从遗传进化树可得21株麻疹病毒基因和国内、国外分离得到的H1a毒株在同一分支中,说明全球流行情况保持一致,其中存在两个小的分支提示可能存在两个不同的小基因变异链同时流行。 二.麻疹病毒流行状况的研究结果 1.2013年济南市发病率为4.46/10万(299/6704036),呈现明显的春季流行,槐荫区、天桥区、历城区为前三位的发病地区。 2.麻疹病毒主要侵犯1岁以下的儿童,其中,0～7月龄占64%(105/164)。其次为20岁以上的成人。不同年龄组间的男女性别差异无统计学意义。 3.发病病例中有免疫接种记录的人群为10例,占总发病数的3.3%,其他均为不详。其中0～1岁的为6例,1～5岁的为3例,20岁以上的1例。 4.临床症状分布除发热、出疹之外前四位为咳嗽、卡它症状、结膜炎和柯氏斑,可供临床参考。 三.麻疹病毒在健康人群中抗体水平的研究结果 1.采集的295份健康人群血清中,IgG阳性率为90.51%(267/295),GMC为1901.25(IU/ml)。阳性率和GMC水平与国内其他地区一些报告基本一致。三个地区中,不同地区的抗体阳性率差异有统计学意义,商河县的阳性率和GMC最高。不同性别间麻疹抗体阳性率差异无统计学意义。各年龄组中麻疹抗体阳性率差异有统计学意义,2岁～4岁组阳性率和GMC最高,GMC水平随着年龄的增长大致呈下降的趋势。 2.对45例8月龄以下婴儿麻疹免疫前后的抗体水平进行监测,显示免疫前抗体阳性率33.33%,免疫后IgG抗体阳性率为100%,GMC水平也从801.15IU/ml提高到2862.32IU/ml。 [结论] 1.21株麻疹野毒株为H1a基因型。 2.对比Hla参考株,21株麻疹野毒株456bp核苷酸片段中,有义突变7处,遗传距离为1-0.017,提示有遗传变异正在发生。 3.遗传进化树中,H1a分支中提示有两个小分支正在流行,需引起重视。 4.应考虑对重点区(县)加大麻疹的防控、监督力度。 5.应考虑对20岁以上的大年龄组人群补种麻疹疫苗,其中育龄妇女人群是重点补种对象。 6.及时对适龄儿童进行免疫接种对阻断麻疹的传播有非常显著的效果。
【关键词】：麻疹病毒 基因型 流行病学 抗体水平监测
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373;R181.3
【目录】：

• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-16
• 符号说明16-17
• 前言17-21
• 第一部分 2013年济南市麻疹病毒的基因型分析21-39
• 研究目的21
• 材料与方法21-25
• 结果25-37
• 讨论37-38
• 结论38-39
• 第二部分 2013年济南市麻疹病毒的监测资料分析39-49
• 研究目的39
• 材料与方法39-42
• 结果42-47
• 讨论47-48
• 结论48-49
• 第三部分 2013年健康人群中麻疹抗体水平的监测49-55
• 研究目的49
• 材料与方法49-51
• 结果51-53
• 讨论53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 攻读学位期间发表的学术论文目录61-62
• 学位论文评阅及答辩情况表62

【参考文献】

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  本文关键词：2013年济南市麻疹病毒的基因型及流行状况分析，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：370124