姜黄素对去卵巢大鼠骨丢失的影响

发布时间：2018-05-03 03:33

  本文选题：绝经后骨质疏松症 + 卵巢切除　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoprosis,PMOP)是由于绝经后雌激素缺乏引起破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成之间的不平衡而发生的骨质疏松，属原发性骨质疏松症。本病以易引发骨折、致残率及死亡率较高为其特征，严重影响中老年妇女健康和寿命，随着人口老龄化的加剧，绝经后骨质疏松的问题越来越突显。近年来国内外已有研究证实，氧化应激在绝经后骨质疏松的发病中起重要作用，用天然抗氧化剂防治骨质疏松症成为一新的概念。 姜黄素(curcumin,C)是一种天然抗氧化剂，可在多种组织诱导血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达降低氧化应激，从而对组织起保护作用，本实验通过去卵巢建立大鼠PMOP模型，给予姜黄素灌胃进行干预，采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法测定血清氧化应激指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量，水溶性四氮唑（water-solubletetrazolium,WST-1）法测定血清抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)的活力，并用免疫组化测定骨组织中HO-1的表达变化，从而探讨姜黄素对去卵巢大鼠骨丢失的作用及其机理，为寻找安全有效的防治方法提供理论依据。 方法： 1动物分组和PMOP动物模型制备 清洁级3月龄雌性Sprague/Dawley大鼠50只，随机分为5组，每组10只：①假手术(Sham)组、②卵巢切除(OVX)组、③卵巢切除+戊酸雌二醇(OVX+E)组、④卵巢切除+高剂量姜黄素(OVX+HC)组、⑤卵巢切除+低剂量姜黄素(OVX+LC)组。大鼠经10%水合氯醛（0.35ml/100g体重）腹腔麻醉后，无菌条件下，经腰背部正中纵行切口进入腹腔背侧，切除②-⑤组大鼠的双侧卵巢，①组大鼠仅切除双侧卵巢下方少许脂肪组织，重量约与卵巢相同。自去卵巢术后7天起，各组大鼠分别进行灌胃给药，共12周。OVX+E组给予戊酸雌二醇0.833mg/kg·d，OVX+HC组给予姜黄素200mg/kg·d灌胃，OVX+LC组给予姜黄素100mg/kg·d灌胃，Sham组及OVX组以10ml/Kg体重给予相应体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液，每日1次。给药剂量每周按体重校正1次。 2双能X线吸收法测量骨密度（bone mineral density,BMD） 用药12周后，分别取各组大鼠置于Osteocore3型双能X线骨密度仪上，通过计算机系统中心动物软件，测量每只大鼠腰椎及双侧股骨BMD，BMD值用g/cm2表示。 3苏木素-伊红(HE)染色及免疫组织化学染色、血清SOD、MDA水平测定 大鼠心脏取血2ml后处死，立即取左侧股骨，进行HE染色、免疫组织化学染色及观察。分别用TBA法及WST-1法测定血清MDA及SOD水平。 4结果判定与图像分析统计学分析 实验结果应用SPSS16.0软件统计分析。所测数值均以均数±标准差(Ｘ－±S)表示，方差齐性检验采用Levene法，各组间变量比较采用完全随机的单因素方差分析，并采用SNK法进行两两比较，相关性分析用pearson积差相关分析。P＜0.05被认为差异有统计学意义。 结果： 1各组大鼠BMD比较 与Sham组相比，OVX组及OVX+LC组股骨、腰椎BMD下降,差异有统计学意义(P 0.05, P 0.05)，OVX+E组差异无统计学意义（P＞0.05），OVX+HC组股骨BMD降低，差异有统计学意义（P 0.05），腰椎BMD差异无统计学意义（P＞0.05）；与OVX组相比，OVX+E组及OVX+HC、OVX+LC组大鼠股骨、腰椎BMD增加，差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05)；与OVX+E组相比，，OVX+LC组大鼠股骨、腰椎BMD降低，差异有统计学意义（P 0.05），而OVX+HC组大鼠股骨、腰椎BMD差异无统计学意义(P＞0.05)；与OVX+LC组相比，OVX+HC组大鼠股骨、腰椎BMD增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2骨组织形态观察 (1)Sham组：骨小梁呈纵向排列，相互连接呈网状，排列密集、有规则，骨小梁数目多，间距小，皮质骨致密。(2)OVX组:骨小梁断裂，排列稀疏，无网状结构，可见大量骨小梁盲端，小梁壁宽度变窄，间距增宽，皮质骨变薄。(3)OVX+E组大鼠骨组织形态与Sham组相似，OVX+HC组及OVX+LC组较OVX组在骨小梁的数量、宽度、长度、分布以及连续性上都有大幅度改善，且OVX+HC组改善更明显。 3免疫组织化学染色结果观察 HO-1蛋白在骨组织中的表达特征：HO-1阳性信号主要位于骨小梁周边的成骨细胞、软骨细胞及骨髓中。Sham组及OVX+E组仅见少量HO-1蛋白表达，两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与Sham组及OVX+E组相比，OVX组HO-1蛋白表达增强（P＜0.05）；与Sham组、OVX+E组及OVX组相比，OVX+HC组及OVX+LC组HO-1蛋白表达增强（P＜0.05；P＜0.05），与OVX+LC组相比，OVX+HC组HO-1表达增强（P＜0.05）。 4血清SOD、MDA水平结果 与Sham组相比，OVX组、OVX+HC组及OVX+LC组血清MDA含量升高，SOD活力降低(P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05)，OVX+E组大鼠血清MDA、SOD水平差异无统计学意义(P＞0.05)；与OVX组相比，OVX+E组、OVX+HC组及OVX+LC组大鼠血清MDA降低，SOD活力升高(P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05)；与OVX+E组相比，OVX+LC组大鼠血清MDA含量升高，SOD活力降低（P＜0.05），OVX+HC组大鼠血清MDA含量差别无统计学意义(P＞0.05)，SOD活性降低（P＜0.05）。与OVX+LC组相比，OVX+HC组大鼠血清MDA降低，SOD活性升高(P＜0.05)。 5相关性分析 各组大鼠血清中SOD活性与左股骨、腰椎BMD呈正相关(r=0.884，P0.01；r=0.890，P0.01)，MDA含量与左股骨、腰椎BMD呈负相关（r=-0.889，P0.01；r=-0.881，P0.01）。 Sham组、OVX组及OVX+E组大鼠骨组织中，HO-1表达水平与左股骨BMD无明显相关性（r=0.292，P＞0.05；r=0.592，P＞0.05；r=0.577，P＞0.05），而OVX+HC组以及OVX+LC组大鼠骨组织中，HO-1表达与左股骨BMD呈正相关(r=0.885，P0.05；r=0.861，P0.05)。 结论： 1氧化应激在PMOP的发病机理中起重要作用。 2姜黄素能提高去卵巢大鼠骨密度，对去卵巢大鼠骨丢失起到抑制作用。 3姜黄素能提高去卵巢大鼠血清中抗氧化酶SOD活性，降低氧化标志MDA含量，改善去卵巢大鼠体内的氧化应激状态。 4姜黄素对去卵巢大鼠骨丢失的抑制作用可能是通过诱导大鼠骨组织HO-1的表达，降低氧化应激实现的。
[Abstract]:Purpose :

Postmenopausal osteoporosis ( PMOP ) is a kind of osteoporosis due to the imbalance between bone resorption and bone formation of osteoblasts due to postmenopausal estrogen deficiency . This disease is characterized by easy initiation of fracture , disability rate and mortality . As population ages increase , the problem of postmenopausal osteoporosis becomes more and more prominent . In recent years , researches have shown that oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of postmenopausal osteoporosis , and it is a new concept to prevent osteoporosis by natural antioxidants .

Objective To study the effect and mechanism of curcumin on bone loss in ovariectomized rats by using thiobarbituric acid ( TBA ) method to determine the content of malondialdehyde ( MDA ) in serum , and to explore the mechanism of curcumin on bone loss in ovariectomized rats .

Method :

Animal grouping and PMOP animal model preparation

Three months old female Sprague - Dawley rats were randomly divided into 5 groups : 鈶

本文编号：1836811