瑞舒伐他汀对心肌梗死兔心房神经重构与电重构的影响

发布时间：2018-05-18 09:25

本文选题：瑞舒伐他汀 + 心肌梗死　；参考：《济南大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的心肌梗死是严重危害人类健康与生命的心血管病急症，其死亡率极高。近年来，心肌梗死渐趋年轻化，且常引起室性与房性心律失常，是造成死亡率较高的重要原因，因此对心梗后并发症的预防与治疗逐渐引起临床医师的重视，通过药物改善心肌梗死后并发症及预后迫在眉睫。心肌梗死后会伴随发生心室重构，心室重构不仅能够使心血管患者心功能严重减退，并发症发生率明显增加，而且使患者的死亡率也明显增加。其主要特征是心肌肥厚、心肌细胞凋亡，某些细胞（成肌纤维细胞）和非细胞成分（胶原纤维）的异常增加，心肌代谢以及电生理的改变，是造成心律失常的重要原因。目前研究热点多集中在心梗后心室重构在室性心律失常中的作用，心梗后心房重构研究较少见。今年有研究表明心肌梗死患者，特别是做事收缩功能减低患者有非常高的房颤发病率，且死亡率亦升高3倍。所以应重视房颤的防治与机制的研究。目前研究提示心房颤动等心律失常的发生机制可能与心房的结构重构、神经重构与电重构有关。研究重点应集中在明确心梗后心房是否发生重构，且尽可能探讨其发生机制。近年来，他汀类药物的研究成为热点，主要体现在其作用机制的多效性，如抗炎症反应、抗氧化应激、改善内皮功能、抗血栓、保护心肌、抗心律失常等多重效应。其中他汀类药物抗心律失常及防止心脏重构的作用已得到普遍关注，成为近年研究的热点之一。本实验研究旨在探讨心肌梗死后心房神经重构的发生及其可能机制，瑞舒伐他汀对心房重构的影响。方法自西岭角动物养殖中心选购28只健康新西兰大白兔（普通级），均为雄性，体重（2.2±0.3）kg，（5±1）月龄。经山东省千佛山医院医学研究中心动物实验室普通饲料喂养2周后，参照Fujita M等报道采用结扎冠状动脉前降支方法建立兔心肌梗死模型。麻醉兔最常采用的麻药为3%戊巴比妥钠，按照45mg/kg剂量经兔耳缘静脉缓慢注射麻药，当兔头低垂时注意减慢注射速度，观察角膜反射与肌张力，当兔角膜反射消失、肌肉松弛时，提示此次麻醉成功，应立即停止注射，以免兔麻醉过深导致死亡。同时为避免手术中污染引起兔感染，所有实验兔均需术前30min给予青霉素（10万/kg）肌注，术后连续3天，每天2次青霉素（10万/kg）注射预防感染。麻醉后将兔固定于小型动物手术台上。备皮和消毒后，术者戴无菌手套后铺洞巾。术前所有兔均需行常规心电图检查。保持兔自然呼吸，紧贴胸骨左缘3、4肋间纵行切开皮肤、皮下组织及肌肉，并切断左侧第3、4肋软骨，游离出3-4cm左右纵行切口，此时需谨慎小心地拨开纵膈胸膜，借助小型撑开器缓慢地充分暴露心脏前面，注意保持两侧胸膜完整，以免造成气胸。再用止血钳轻轻夹起心包壁层并剪开，轻抬心脏以便充分暴露左冠状动脉前降支，仔细观察兔左冠状动脉及其分支（或左室支）的解剖位置。于前降支中上1/3处用6-0缝合线结扎血管。15分钟后直视下可明显见左心室前壁和心尖部心肌颜色逐渐由红变暗红乃至苍白，中心缺血区域周边有暗红色充血带显示，心脏搏动减弱。15分钟后行心电图检查以进一步明确是否造成心肌梗死模型，如可见Ⅰ、aVL导联ST段明显抬高，证实心肌梗死模型复制成功。术中应充分止血，心包不予缝合，最后逐层缝合关胸，密切观察一段时间至兔自然苏醒，送回饲养室，术后10小时内不予喂食固体食物。心肌梗死模型制作完毕24小时后将仍存活兔随机分为心梗组和药物干预组。假手术组实验兔仅左前降支相同位置下穿线，但不结扎。自术后第一天开始，药物干预组给予瑞舒伐他汀（10mg/kg/d，阿斯利康制药生产）灌胃8周，心梗组及假手术组以等量生理盐水灌胃8周。最终获得具有完整实验资料的兔共24只，分别为：心梗组（MI，n=7）、药物干预组（Rt，，n=8）、假手术组（S，n=9）。各组实验兔经不同方式灌胃8周后称取体重，应用10%水合氯醛以2ml/kg剂量进行腹腔注射麻醉后再次开胸。充分暴露心脏后，可见心脏前壁与心尖部位搏动明显较其他部位弱。主要大血管用止血钳夹住，剪去大血管，迅速取出心脏，立即用无菌生理盐水冲洗，尽量在冰上操作，保持低温环境，剪去右房、左室及右室，分离左房并分成两部分处理。一部分新鲜组织立即冻存于-196℃液氮中，同时做好标注，用于蛋白印迹技术与基因扩增技术。另一部分新鲜组织置于包埋盒中放入4％多聚甲醛固定，用铅笔做好标记，用于免疫组织化学技术。采用免疫组织化学法测定酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase， TH）及胆碱乙酰转移酶组织表达量，通过Western Blot法测定心房组织酪氨酸羟化酶蛋白表达量，荧光定量PCR法检测酪氨酸羟化酶和KCND3钾离子通道蛋白mRNA表达水平。结果 1．心房组织TH与CHAT阳性神经纤维再生现象：灌胃8周后对兔心房组织中自主神经重构变化进行分析，通过免疫组织化学方法检测得到的结果显示：假手术组兔心房组织TH和CHAT神经纤维阳性染色较少，心梗组TH和CHAT阳性神经纤维较多，而药物干预组较少。统计学分析结果示：心肌梗死组兔的心房TH和CHAT阳性神经纤维密度明显高于假手术组，而药物干预组的TH和CHAT阳性神经纤维密度明显低于心梗组，差异具有统计学差异（P0.05）；药物干预组上述指标与假手术组水平无明显统计学差异（P0.05）。 2．心房组织TH mRNA的表达水平：采用荧光定量PCR法检测TH mRNA表达水平并进行统计学分析得到结果：与假手术组相比，心梗组TH mRNA表达水平升高，统计学分析证明具有明显差异（P0.05）；与心肌梗死组相比，药物干预组TH mRNA表达下调，差异具有统计学意义（P0.05），药物干预组上述指标与假手术组水平无明显统计学差异（P0.05）。 3．心房组织KCND3钾离子通道蛋白mRNA的表达水平：应用荧光定量PCR法检测KCND3钾离子通道蛋白mRNA表达水平并进行统计学分析得到结果：与假手术组相比，心梗组KCND3钾离子通道蛋白mRNA表达下调，统计学分析证明差异均具有统计学意义（P0.05）；与心梗组相比，药物干预组KCND3钾离子通道蛋白mRNA表达上调，差异具有统计学意义（P0.05），药物干预组上述指标与假手术组水平无明显统计学差异（P0.05）。 4．心房酪氨酸羟化酶表达：采用蛋白印迹技术测定TH蛋白水平表达量得到如下结果：与假手术组相比，心梗组TH蛋白表达量升高，统计学分析证明具有明显差异（P0.05）；与心梗组相比，药物干预组TH蛋白表达量下降，差异具有统计学意义（P0.05），药物干预组上述指标与假手术组水平无明显统计学差异（P0.05）。结论 1．心肌梗死后心房发生神经重构与电重构改变。 2．瑞舒伐他汀对MI后心房神经重构与电重构具有改善效应，这可能是他汀类药物能够减少心梗后房性心律失常的重要机制之一。
[Abstract]:Purpose

In recent years , there is a significant increase in cardiac function in patients with myocardial infarction , such as myocardial hypertrophy , apoptosis of myocardial cells , abnormal cardiac function , anti - thrombosis , protection of cardiac muscle and arrhythmia .

method

A model of acute myocardial infarction ( MI ) was established by using anterior descending branch of coronary artery . After operation , the rabbits were given penicillin ( 100 000 mg / kg ) for 3 consecutive days .

Results

The results showed that TH and CHAT positive nerve fibers were significantly higher in myocardial infarction group than in sham operation group , while TH and CHAT positive nerve fibers were significantly lower in myocardial infarction group than those in sham operation group .
There was no statistically significant difference between the above mentioned indexes of drug intervention group and the level of sham operation group ( P0.05 ) .

2 . The expression level of TH mRNA in atrial tissue was determined by fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( PCR ) . Results : Compared with sham operation group , TH mRNA expression level in myocardial infarction group increased , and statistical analysis showed significant difference ( P0.05 ) .
Compared with the myocardial infarction group , TH mRNA expression was down - regulated in the drug intervention group ( P0.05 ) . There was no significant difference between the above indexes of the drug intervention group and the sham operation group ( P0.05 ) .

3 . Expression level of KCND3 potassium ion channel protein mRNA in atrial tissue : mRNA expression level of KCND3 potassium channel protein was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( PCR ) method . Results : Compared with sham operation group , the expression of KCND3 potassium ion channel protein in myocardial infarction group was down regulated , and statistical analysis showed that the difference was significant ( P0.05 ) .
Compared with the myocardial infarction group , the expression of KCND3 potassium channel protein in the drug intervention group was up - regulated and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . There was no significant difference between the above - mentioned indexes of the drug intervention group and the sham operation group ( P0.05 ) .

4 . The expression of TH protein was determined by Western blotting . Compared with the sham operation group , the expression of TH protein in the myocardial infarction group was increased , and the statistical analysis showed significant difference ( P0.05 ) .
Compared with the myocardial infarction group , the expression of TH protein decreased and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . There was no statistically significant difference between the above mentioned indexes of the drug intervention group and the sham operation group ( P0.05 ) .

Conclusion

1 . After myocardial infarction , the atrial neuroreconstruction and electrical remodeling were changed .

2 . Refluvastatin has an improved effect on the remodeling and electrical remodeling of atrial nerve after MI , which may be one of the important mechanisms in which Statins can reduce atrial arrhythmias after myocardial infarction .
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R542.22

【参考文献】