骨痹合剂干预去双前肢直立诱导大鼠颈椎间盘退变模型的机制研究

发布时间：2018-10-12 07:41

【摘要】：目的：建立一种与人类颈椎间盘退变导致颈椎病发病过程相似的去双前肢直立诱导大鼠颈椎间盘退变模型，在此模型成功的基础上，观察院内制剂经验方骨痹合剂对去双前肢直立诱导大鼠颈椎间盘退变模型的影响。方法：实验动物及分组：选用孕期15日龄的SD大鼠3只，分笼饲养，把出生第10天的20只幼鼠，随机分为2组，分别为正常组和去双前肢模型组。造模方法：按盐酸氯氨酮0.1g／kg体重行腹腔注射麻醉，将幼鼠在双前肢剪毛和清洁后，用碘伏消毒幼鼠上肢皮肤，取前臂近端1/3处横向切开皮肤，剥离筋膜和肌肉，暴露三角肌下血管神经束，并用丝线结扎，，在结扎处远端用咬骨钳咬断肱骨，再用剪刀剪断皮肤、肌肉、血管和神经，使双上肢离断。将盐酸庆大霉素滴入切口后，再将肌肉、筋膜、皮肤逐层缝合，最后在切口处涂金霉素眼膏预防感染，术后置于饲养笼内饲养。术后6个月分别处死正常对照组和模型组，取整个颈椎作为检测标本，通过固定、脱钙、脱水、包埋、切片、展片、烤片，行HE+阿尔新兰复染、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色及CollagenⅩ、CollagenⅠ免疫荧光检测。评价模型是否成功。在模型成功的基础上，选用孕期15日龄的SD大鼠12只，分笼饲养，把出生第10天的80只幼鼠，随机分为2组（6月龄组和9月龄组），每组40只，并全部去双前肢（造模及喂养方法同前）。在大鼠5月龄时，将6月龄组随机分为4组，每组10只，分别为模型组、生理盐组、骨痹合剂组、阳性药物对照组，分别给药干预1个月，模型组不给药，生理盐水组按1ml/100g灌胃，骨痹合剂组按骨痹合剂1ml/100g灌胃，阳性药物对照组以氨糖美辛1ml/100g灌胃。每隔12小时各给药一次，连续4周。在大鼠6月龄时，分别处死4组大鼠，取下颈椎及周围肌肉标本行新鲜冰冻切片HE+阿尔新兰复染观察，颈椎标本通过固定、脱钙、脱水、包埋、切片、展片、烤片，行HE+阿尔新兰复染、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色及CollagenⅩ、CollagenⅠ免疫荧光检测。9月龄组在8月龄时随机分为4组（方法同6月龄组），给药方法与6月龄组相同，均给药4周。在大鼠9月龄时，分别处死4组大鼠，标本的观察和检测方法同前。结果：正常对照组的椎间盘结构正常，髓核居中、纤维环包绕四周纤维环排列层次清晰呈整齐完整的板层状结构，终板完整；钙化层与非钙化层两层之间有潮标分布；生长软骨呈柱状排列，紧贴椎体。模型组中椎间盘形态改变，髓核内开始出现裂隙、髓核皱缩，纤维环内层部分纤维扭曲、排列紊乱与髓核的界线模糊，椎体结构有部分破坏，椎间盘发生软骨细胞变性、坏死，软骨终板钙化、断裂等组织形态学改变，椎间盘高度降低。CollagenⅠ免疫荧光显示：模型组CollagenⅠ阳性细胞表达比例较正常对照组高。CollagenⅩ免疫荧光显示：模型组中的CollagenⅩ阳性细胞表达比例较正常对照组高。骨痹合剂组的椎间盘较其它三组比较，纤维环排列扭曲，结构尚完整，层次尚清晰。髓核皱缩程度轻，软骨终版钙化层、潮标向软骨表层推进，有部分软骨细胞染色不均匀，终板钙化层与非钙化层两层之间有潮标分布。CollagenⅠ免疫荧光显示：骨痹合剂组阳性细胞表达比例较其它三组低；CollagenⅩ免疫荧光显示：骨痹合剂组阳性细胞表达比例较其它三组低。结论：成功建立了去双前肢直立诱导大鼠颈椎间盘退变模型，此模型制作简便，可重复性强，与人类直立状态颈椎间盘退变导致颈椎病发病机制相似。骨痹合剂可延缓去双前肢直立诱导大鼠颈椎间盘退变模型的椎间盘退变状态，可能通过下调细胞外基质CollagenⅠ、CollagenⅩ表达，延缓颈椎间盘的退变进程。
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【学位授予单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R274.9

【参考文献】