【摘要】：目的:本实验以中医“肾主骨,生髓”理论为基础,研究左归丸与右归丸对去卵巢大鼠骨髓成骨-成脂分化的影响,进一步探讨中医“髓”与“骨”的关系以及防治PMOP可能存在的机制。材料与方法:SPF级2月龄雌性大鼠65只,依据体重随机分层的方法,分为空白组10只,假手术组10只,模型组45只。采用10%水合氯醛按0.3m L/100g体重进行腹腔麻醉,除空白组外,模型组从背部入路切除双侧卵巢,其中假手术组只切除卵巢周围适量的脂肪组织,不切除双侧卵巢,最后逐层缝合,切口处给予青霉素肌肉注射,预防感染。术后7天,依据大鼠存活情况,分为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW),共6组。经过12周给药治疗后,去除由于手术、灌胃等其它原因导致死亡的大鼠5只,共纳入本次实验的大鼠为60只,取材对指标进行检测。全部实验大鼠取材前24h禁止喂食,前2h禁止给药,称重并麻醉,对大鼠进行腹主动脉取血,在室温下静置2h后,离心,分离血清,冻存于-80℃冰箱,用于血脂检测;取大鼠第2、3、4节腰椎并用湿润的纱布和锡箔纸包裹好,冻存于-80℃冰箱,用于双能X线骨密度测量;取大鼠股骨,并将附着于其上的肌肉、筋膜等组织剥离、剔除,置于4%多聚甲醛溶液中固定,然后投入到脱钙液中脱钙约21天,进行石蜡切片,用于骨组织形态学HE染色,观察骨髓脂肪细胞数目;取大鼠股骨,剪断股骨两头,暴露骨髓腔,用PBS缓冲液反复冲洗髓腔,冲出骨髓,直至骨干发白透明。将冲出的骨髓离心,弃去上层PBS,将装有骨髓的离心管冻存于-80℃冰箱,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测大鼠骨髓组织成骨指标Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN和成脂指标PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4基因和蛋白的表达情况。结果:1.左归丸与右归丸对去卵巢大鼠第2、3、4节腰椎骨密度的影响各组大鼠第2、3、4节腰椎骨密度检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组BMD表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组BMD表达量降低,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组BMD表达量有所升高,有显著性差异(P0.01);与补佳乐组比较,左归丸组BMD表达量相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组BMD升高不及补佳乐组,有显著性差异(P0.01);与左归丸组比较,右归丸组BMD升高不及左归丸组,有显著性差异(P0.01)。左归丸与右归丸均可以提高去卵巢大鼠BMD,其中左归丸组效果优于右归丸组。2.左归丸与右归丸对去卵巢大鼠血脂的影响各组大鼠血脂检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组血清TC、TG、LDL-C、HDL-C表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组血清TC、TG、LDL-C表达量降低,HDL-C表达量升高,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组TC、TG、LDL-C表达量有所降低,HDL-C表达量升高,有显著性差异(P0.01或P0.05)。与补佳乐组比较,左归丸组、右归丸组TC、TG、LDL-C、HDL-C表达量相当,无显著性差异(P0.05);与左归丸组比较,右归丸组TC、TG、LDL-C、HDL-C表达量相当,无显著性差异(P0.05)。3.左归丸与右归丸对去卵巢大鼠骨髓组织Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN的影响各组大鼠骨髓组织成骨m RNA检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表达量降低,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN m RNA表达量有所升高,有显著性差异(P0.01或P0.05);与补佳乐组比较,左归丸组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表达量相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组Runx2、CollagenⅠm RNA表达量升高不及补佳乐组,有差异(P0.05);与左归丸组比较,右归丸组CollagenⅠm RNA表达量升高不及左归丸组,有差异(P0.05)。各组大鼠骨髓组织成骨蛋白检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量降低,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量有所升高,有显著性差异(P0.01或P0.05);与补佳乐组比较,左归丸组Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量升高不及补佳乐组,有显著性差异((P0.01或P0.05);与左归丸组比较,右归丸组CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表达量不及左归丸组,有显著性差异(P0.01或P0.05)。4.左归丸与右归丸对去卵巢大鼠股骨近端骨髓脂肪细胞数目的影响各组大鼠股骨近端HE染色结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组股骨近端骨小梁排列致密整齐,形态完整,骨髓中有少量的脂肪细胞,无显著性差异(P0.05),模型组骨小梁结构散乱稀疏变细,股骨近端骨髓脂肪细胞数目增多,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组股骨近端骨髓脂肪细胞数目明显减少,有显著性差异(P0.01);与补佳乐组比较,左归丸组股骨近端骨髓脂肪细胞数目相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组股骨近端骨髓脂肪细胞数目增多,有显著性差异(P0.01);与左归丸组比较,右归丸组股骨近端骨髓脂肪细胞数目增多,有显著性差异(P0.01)。5.左归丸与右归丸对去卵巢大鼠骨髓组织PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4的影响各组大鼠骨髓组织成脂m RNA检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表达量升高,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表达量有所降低,有显著性差异(P0.01或P0.05);与补佳乐组比较,左归丸组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表达量相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组C/EBPαm RNA表达量升高,有显著性差异(P0.01);与左归丸组比较,右归丸组C/EBPαm RNA表达量升高,有显著性差异(P0.01)。各组大鼠骨髓组织成脂蛋白检测结果如下:给药12周后,与空白组比较,假手术组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表达量相当,无显著性差异(P0.05),模型组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表达量升高,有显著性差异(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表达量有所降低,有显著性差异(P0.01或P0.05);与补佳乐组比较,左归丸组PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表达量相当,无显著性差异(P0.05),右归丸组PPARγ、C/EBPβ蛋白表达量升高,有显著性差异(P0.01或P0.05);与左归丸组比较,右归丸组PPARγ、C/EBPβ蛋白表达量升高,有显著性差异(P0.01或P0.05)。结论:1.实验大鼠切除双侧卵巢后,腰椎骨密度降低;左归丸与右归丸可有效改善去卵巢骨质疏松症大鼠骨密度的流失,防治绝经后骨质疏松症。2.实验大鼠切除双侧卵巢后,出现血脂代谢紊乱,骨髓向脂肪细胞分化增强。左归丸与右归丸可有效改善去卵巢骨质疏松大鼠脂代谢紊乱,促进成骨分化,抑制成脂分化,调控骨髓成骨-成脂分化平衡。3.绝经后骨质疏松症的病机之一与骨髓成骨-成脂分化失衡有关。左归丸与右归丸可以有效防治绝经后骨质疏松症,其作用机理与其调控骨髓成骨-成脂分化平衡有关,本研究为临床应用左归丸与右归丸防治绝经后骨质疏松症提供了一定的实验依据。
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【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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本文编号：
2294651
